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金虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒电泳图如下，目的基因1500bp，各位分析下是什么原因

自己构建载体，在抗性板上长出菌落后，挑取单菌落摇菌，提取质粒，进行PCR，但是除了1500bp处之外还有很多杂带，是什么原因呢？

acs6重组质粒pcr2013-03-21 14 时 25 分_副本.jpg

1楼 2013-03-21 20:02:04

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铁杆木虫 (职业作家)

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xy656691: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢啊，我回来把质粒浓度稀释下看看 2013-03-22 10:06:08

用质粒为模板做PCR的话，质粒只需要pg级别，所以一般要把质粒稀释~1000倍。我感觉是你的模板加多了，杂带可能有质粒模板的几种带型，最小的是引物二聚体。

2楼2013-03-22 01:53:13

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荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

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xy656691: 金币+2, ★★★很有帮助, 我试用空质粒作为模版扩增来看看引物特异性 2013-03-22 10:07:03
xy656691: 金币+1 2013-04-28 19:22:56

是不是引物特异性不强
扩个空质粒作对照吧，查看是什么原因
点样的时候，顺便点个质粒的样

3楼2013-03-22 05:29:20

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