| 查看: 1149 | 回复: 8 | ||||
[求助]
毛状根DNA的提取
|
|
求助啊！！！！！！！！ 现在在做东南景天的毛状根诱导，按照CTAB法的试剂盒提取，死活提取不出来毛状根的DNA啊！！！！ 文献上报道说SDS和CTAB法都可以提出出来，为毛我的就提取不出来呢？？？ 虫友们帮我啊。。。。哭。。。。。  |
回复此楼» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有291人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有7人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - APEPI: 64
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
2楼2013-03-20 19:24:46
泠安然
木虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1955.8
- 红花: 1
- 帖子: 48
- 在线: 15.9小时
- 虫号: 1349104
- 注册: 2011-07-18
- 性别: MM
- 专业: 植物生理与生化
3楼2013-03-21 16:54:03
送鲜花一朵 |
是这样的： 1.取毛状根0.5g（因为我的毛状根长的不好，所以原料很少，各位有什么好办法令毛状根长势好一些么？），液氮研磨至粉末。 2.转移细粉到一个1.5ml离心管，不解冻，加600μl 65℃预热的裂解液PL (加入β-巯基乙醇至2%)，剧烈涡旋振荡混匀，用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解，加入6μl RNA酶（20mg/ml）。 3.65℃水浴30分钟，在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。 4.用等体积酚/氯仿（1：1）抽提一遍。 5.加入700μl氯仿/异戊醇（体积比24：1混合），颠倒充分混匀几分钟，13,000rpm 离心5分钟。 6.小心吸取上清到新的1.5ml离心管。如上清比较浑浊，则需要重复步骤4一遍，直到得到透亮上清。 7.加入1.5倍体积结合液PQ （已加入无水乙醇）后立刻涡旋，充分混匀。 8.将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入吸附柱AC中，13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。 8. 加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。 9. 加入700μl漂洗液WB（已加入无水乙醇），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 10. 加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 11. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，除去漂洗液。 12. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热），室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。 就这样，用的试剂公司的试剂盒，买过两次，康为的和艾德莱公司，植物CTAB法提取试剂盒，提过N次还是提不出来。。。 要哭了。。。 |
4楼2013-03-21 21:34:54
5楼2013-03-21 21:36:41
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - APEPI: 64
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
【答案】应助回帖
★ ★ ★
Bella0224: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-22 15:19:07
Bella0224: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-22 15:19:07
|
1 关于发根怎样加快生长，可以对培养条件进行优化，入手方向包括培养基，温度，光照，转速，培养瓶装液量等等 2 楼主贴的方法应该是直接参照试剂盒的吧，我做试剂都是自己配的，一般不用试剂盒（有时候试剂盒吹得很厉害，但很可能只是对特定某些植物材料效果比较好，使用试剂盒不太好自己调整摸索）。你的问题一方面我感觉可能是植物材料裂解不完全，试试延长65度处理时间，酚氯仿抽提步骤也不要重复太多次。此外，接下来先不用吸附柱，可以换成传统CTAB法的处理步骤试试，看能否获得DNA。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
6楼2013-03-22 05:39:58
紫眸玉儿
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 5971.7
- 散金: 5
- 帖子: 290
- 在线: 286.7小时
- 虫号: 1380108
- 注册: 2011-08-25
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
7楼2013-03-22 10:35:44
8楼2013-03-22 15:18:52
9楼2013-03-22 15:19:32
