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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么我算出来的酶活那么小呢,都不到1呢 已有2人参与

在一定条件下,每分钟释放出1μmol对硝基苯酚所消耗的酶量定义为1个脂肪酶活力单位(U)。
按下式计算酶活:
X=cV/(tm)        
式中:
X为脂肪酶活力,U•mg-1;c为对硝基苯酚浓度,μmol•mL-1;V为酸碱调节后的反应液终体积,mL;m为酶的质量,mg;t为作用时间,min。
       我根据上面公式计算出来的脂肪酶活力很小,10的-4次方左右的,有哪位知道是哪里出了问题呢?我用的是PNPP法测酶活性,对硝基苯酚浓度C根据标准曲线算出来的,底物与酶液反应后,用碳酸钠溶液萃取,最后体积是10ml,反应时间10min,酶的用量是100微升*15mg/ml=1.5mg
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小小小90

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 幽幽深谷竹 at 2013-04-02 10:27:05
要看你测的是什么,脂肪酶的活力一般都不高。比如植食性昆虫,这个酶肯定不会高,都是1以下。酶活力单位可以自己定义的,换成G也可以的。...

你好,需要你的帮助哈,,我用的是终止法测酶活性,做酸/中性转化酶测定时,是加0.2mL酶液+0.8mL酶反应液,反应30min后,加1mLDNS试剂反应5min显色,最后定容至10mL测OD值,计算公式是
酶活力=C*Vt*n/Fw*t*Vs这里的n是提取液测定的稀释倍数,这里到底指多少啊 ?有另外的酶活性表示方法吗?
23楼2014-09-03 17:12:30
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2013-03-19 13:05:18
有测纯度吗?

什么纯度啊?我的酶是自己用酶粉配的
4楼2013-03-19 13:53:28
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weebug

版主 (著名写手)

喔,有没优化的温度,底物浓度,酶浓度呢?
天蓝蓝兮日头晒
5楼2013-03-19 17:04:53
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非常龙齐齐

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2013-03-19 17:04:53
喔,有没优化的温度,底物浓度,酶浓度呢?

35℃,酶浓度15mg/ml,底物浓度1.8微摩尔/ml
6楼2013-03-19 17:09:22
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