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ma102389

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么能尽可能的降低RNA中的杂DNA的含量？请各位大师指点迷津啊……

提取细菌RNA后发现有DNA污染，没法进行下一步的实验，请问怎么能尽可能的降低DNA的含量？请各位大师指点迷津啊…… 我想做RT-PCR，进行共转录验证，可是阴性对照也能P出来，求指教啊！
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1楼 2013-03-16 17:53:53
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在提取的过程中要注意，提取后可以加入Dnase
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2楼2013-03-16 20:18:02
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yixinyuan
引用回帖:
2楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-03-16 20:18:02
在提取的过程中要注意，提取后可以加入Dnase

3楼2013-03-16 21:17:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ma102389: 金币+1, ★有帮助 2013-03-18 13:43:43
一般的核酸提取方法提出来的样品是同时含有RNA和DNA的。要用RNA逆转录的样品必需做DNase消化，一般是提完RNA后做消化后再定量逆转录。
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4楼2013-03-17 01:11:16
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ma102389

新虫 (初入文坛)
我是用试剂盒提的，但是提完之后发现有300ng/v 的DNA   用DNA酶处理完之后还有100ng左右，做完反转录做PCR可以得到目的片段，可是以RNA为阴性对照PCR 也可以得到目的片段啊？？？  也就是说DNA酶处理的还是不够彻底……这个问题怎么解决啊？？？谢谢各位了。
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5楼2013-03-18 13:30:59
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ma102389

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-17 01:11:16
一般的核酸提取方法提出来的样品是同时含有RNA和DNA的。要用RNA逆转录的样品必需做DNase消化，一般是提完RNA后做消化后再定量逆转录。

我做了DNA消化了，但是效果不明显。DNA含量有所下降，但是还是达不到要求啊！
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6楼2013-03-18 13:50:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ma102389 at 2013-03-18 13:50:21
我做了DNA消化了，但是效果不明显。DNA含量有所下降，但是还是达不到要求啊！...

DNase消化时酶的用量要根据底物的量来做。效果不好可能是你的样品量太大。一般是根据下面实验的用量计算一下大致用多少样品再做DNase处理。
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7楼2013-03-19 00:29:36
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