24小时热门版块排行榜    

查看: 1012  |  回复: 6

ma102389

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么能尽可能的降低RNA中的杂DNA的含量?请各位大师指点迷津啊……

提取细菌RNA后发现有DNA污染,没法进行下一步的实验,请问怎么能尽可能的降低DNA的含量?请各位大师指点迷津啊…… 我想做RT-PCR,进行共转录验证,可是阴性对照也能P出来,求指教啊!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在提取的过程中要注意,提取后可以加入Dnase
2楼2013-03-16 20:18:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-03-16 20:18:02
在提取的过程中要注意,提取后可以加入Dnase

3楼2013-03-16 21:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ma102389: 金币+1, 有帮助 2013-03-18 13:43:43
一般的核酸提取方法提出来的样品是同时含有RNA和DNA的。要用RNA逆转录的样品必需做DNase消化,一般是提完RNA后做消化后再定量逆转录。
4楼2013-03-17 01:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ma102389

新虫 (初入文坛)

我是用试剂盒提的,但是提完之后发现有300ng/v 的DNA   用DNA酶处理完之后还有100ng左右,做完反转录做PCR可以得到目的片段,可是以RNA为阴性对照PCR 也可以得到目的片段啊???  也就是说DNA酶处理的还是不够彻底……这个问题怎么解决啊???谢谢各位了。
5楼2013-03-18 13:30:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ma102389

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-17 01:11:16
一般的核酸提取方法提出来的样品是同时含有RNA和DNA的。要用RNA逆转录的样品必需做DNase消化,一般是提完RNA后做消化后再定量逆转录。

我做了DNA消化了,但是效果不明显。DNA含量有所下降,但是还是达不到要求啊!
6楼2013-03-18 13:50:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ma102389 at 2013-03-18 13:50:21
我做了DNA消化了,但是效果不明显。DNA含量有所下降,但是还是达不到要求啊!...

DNase消化时酶的用量要根据底物的量来做。效果不好可能是你的样品量太大。一般是根据下面实验的用量计算一下大致用多少样品再做DNase处理。
7楼2013-03-19 00:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ma102389 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 号外号外 +4 GZUZM 2026-08-24 4/200 2026-08-24 18:21 by 张春生
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +20 koalala 2026-08-24 22/1100 2026-08-24 18:01 by Nano-Firefly
[基金申请] 人气不行了 +9 fansofjerry 2026-08-21 9/450 2026-08-24 17:48 by zhaozhengxin
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +6 图啦图啦 2026-08-24 6/300 2026-08-24 17:44 by 小小红帆
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +5 scalable 2026-08-24 5/250 2026-08-24 17:03 by spiderzhuzhi
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见