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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我想做SSH消减抑制杂交法，有好多不明白的地方~求助
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装公子

银虫 (初入文坛)

[求助] 我想做SSH消减抑制杂交法，有好多不明白的地方~求助

我想做微紫青霉在不同生长条件下的基因表达差异，关键是找出差异的基因
没接触过SSH，纯新手，感觉这个实验花费不小，心里又比较没底，有好多问题想请教大家

1. 是否一定要构建消减文库
2. 能不能直接拿最后的PCR产物去测序，或者要转质粒再筛选后才能测序
3. 如果成功得到一些序列，是不是必须要做northern blot之类的再去验证差异基因的表达情况，还有哪些其他方法可以来验证
4. 我做的微紫青霉尚未进行全基因组测序，SSH实验得到的测序结果该如何分析

分子基础薄弱，不懂的地方太多，希望有经验的童鞋能帮我回答下~~不胜感激
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世上只有一种英雄主义
1楼 2013-03-15 10:19:40
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jk_xdx

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
装公子: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-03-22 09:31:53
建议你换方法，不要以为做了 就一定会得到好的结果，这个实验后面的测序数目也不小，整体算下来钱数少不了，而且你能否找到就看你的运气了。
不如找个公司测转录组，结果让他们帮忙分析。
这是我的经验，信不信你自己看吧。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-21 17:52:09
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装公子

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jk_xdx at 2013-03-21 17:52:09
建议你换方法，不要以为做了 就一定会得到好的结果，这个实验后面的测序数目也不小，整体算下来钱数少不了，而且你能否找到就看你的运气了。
不如找个公司测转录组，结果让他们帮忙分析。
这是我的经验，信不信你 ...

多谢建议，我也不准备做这个方法了，太不靠谱，哈哈
赞一下 回复此楼
世上只有一种英雄主义
3楼2013-03-22 09:31:32
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