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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] 简并引物

大家好,我现在在设计杨梅里己糖激酶的简并引物,想做这个基因的QPCR,主要目的是看这个酶的基因在不同品种杨梅表达的差异。
在ncbi搜索蛋白质序列的时候出现不同种酶(如下图),那这几种是同工酶还是基因家族啊?
我有必要把这所有种的都测序出来吗?最好是能做全吧,那我这简并引物该怎么设计呢?
我现在只设计了一对,在测序中。。。
请高手指教下啊,非常感谢!!!

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shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-20 03:27:35
不太清楚是怎么回事。你测序的这个蛋白同源性和其他的序列是多少?此外,其他物种的果糖激酶数目可能不同,参考一下果糖激酶可以分为几个亚型。做tree时应该选取一个相对古老的基因作为outgroup,选取序列时在避免相 ...

同源性是92%-95%,就是上面的第一个图最后一个数据。我用的软件是MEGA,这个软件做进化树好吗?另外有人提议说做一个RNA-Seq,不知道效果怎么样
6楼2013-03-20 09:10:17
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查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shiliyusly: 金币+3 2013-03-13 13:27:07
从预测的功能来看,至少它们有可能是催化同一反应的,也就是所谓的同工酶。蛋白序列长度差不多,很可能是基因家族。你可以把这几个蛋白序列做一下alignment,看看同源性如何。
简并引物的设计参考
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3011161
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1841791
2楼2013-03-12 23:41:13
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-12 23:41:13
从预测的功能来看,至少它们有可能是催化同一反应的,也就是所谓的同工酶。蛋白序列长度差不多,很可能是基因家族。你可以把这几个蛋白序列做一下alignment,看看同源性如何。
简并引物的设计参考
http://emuch.n ...

如果genbank里有5种同工酶,我都想测序的话,我是要分别对这5种蛋白质序列设计简并引物吗?还是设计一对简并引物可能做出P出多种同工酶呢?
3楼2013-03-13 15:08:52
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-12 23:41:13
从预测的功能来看,至少它们有可能是催化同一反应的,也就是所谓的同工酶。蛋白序列长度差不多,很可能是基因家族。你可以把这几个蛋白序列做一下alignment,看看同源性如何。
简并引物的设计参考
http://emuch.n ...

fructokinase我设计的一对兼并引物的序列测出来了,做了一下blastx,同源性如下图1,后来我又挑选了一些做系统进化树,sequence21是我测出来的序列,感觉有点奇怪,怎么和其他的都离的很远呢,还有一个我设计的基因也有类似情况。这个正常吗?

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4楼2013-03-19 21:43:37
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