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磨砂雨2010银虫 (初入文坛)
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关于小鼠脾脏磁珠分选后的一些问题
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先非常感谢各位大侠看我的帖子~我的问题是这样的： 小鼠处死后，脾脏可以分离出多少PBMC呢？ 分离出的PBMC经过磁珠分选CD4+T细胞，又可以分选出多少呢？ 分选出的CD4+T细胞，应用流式方法进行Th17、Th1、Treg的比例变化检测，以及流式细胞内染色检测IL-17、TNF-α、TNF-β的细胞因子水平后，流式过后的细胞还可以继续用来做western blot检测FOXP3、T-Bet、ROR-γt的水平么？ 一般做western blot的话细胞数量需要多少呢？ 非常非常感谢~非常非常感谢~ |
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【答案】应助回帖
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磨砂雨2010: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-06-18 14:31:54
kx444555: 金币+3, 经验之谈 2013-06-18 14:38:31
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kx444555: 金币+3, 经验之谈 2013-06-18 14:38:31
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balb/c 鼠一般看你做的熟练程度 做得好的话，至少可以得到3-5*10^7个脾细胞，脾细胞其实就是脾脏的淋巴细胞 研磨前最好先放血 小鼠CD4+CD25+的比例很高5-10%，这也要看你分离的水平了 要多练习 我们使用流式分选的，别的动物，比例只有2%左右，但是做下来效果也不错。 为什么要分选后在做流式呢？ 如果你脾细胞得到的多的话，可以最开始研磨的时候把脾脏用无菌刀片切成两部分 一部分做流式，剩下的冻起来以后做RT,WB |
4楼2013-06-17 16:18:14