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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于小鼠脾脏磁珠分选后的一些问题
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磨砂雨2010

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于小鼠脾脏磁珠分选后的一些问题

先非常感谢各位大侠看我的帖子~我的问题是这样的：
小鼠处死后，脾脏可以分离出多少PBMC呢？
分离出的PBMC经过磁珠分选CD4+T细胞，又可以分选出多少呢？
分选出的CD4+T细胞，应用流式方法进行Th17、Th1、Treg的比例变化检测，以及流式细胞内染色检测IL-17、TNF-α、TNF-β的细胞因子水平后，流式过后的细胞还可以继续用来做western blot检测FOXP3、T-Bet、ROR-γt的水平么？
一般做western blot的话细胞数量需要多少呢？

非常非常感谢~非常非常感谢~
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期待幸福
1楼 2013-03-12 12:51:36
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lanlan8928

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

同样问题求高人指点
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2楼2013-05-03 21:05:58
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意孤城_

金虫 (正式写手)
我对你的试验比较感兴趣，能说说嘛
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3楼2013-05-03 23:03:57
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simonforever

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
磨砂雨2010: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-06-18 14:31:54
kx444555: 金币+3, 经验之谈 2013-06-18 14:38:31
balb/c 鼠一般看你做的熟练程度
做得好的话，至少可以得到3-5*10^7个脾细胞，脾细胞其实就是脾脏的淋巴细胞
研磨前最好先放血
小鼠CD4+CD25+的比例很高5-10%，这也要看你分离的水平了
要多练习
我们使用流式分选的，别的动物，比例只有2%左右，但是做下来效果也不错。
为什么要分选后在做流式呢？
如果你脾细胞得到的多的话，可以最开始研磨的时候把脾脏用无菌刀片切成两部分
一部分做流式，剩下的冻起来以后做RT,WB
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4楼2013-06-17 16:18:14
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磨砂雨2010

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by simonforever at 2013-06-17 16:18:14
balb/c 鼠一般看你做的熟练程度
做得好的话，至少可以得到3-5*10^7个脾细胞，脾细胞其实就是脾脏的淋巴细胞
研磨前最好先放血
小鼠CD4+CD25+的比例很高5-10%，这也要看你分离的水平了
要多练习
我们使用流式分 ...

谢谢~我是想分选出来之后再上流式看细胞比例变化~~
那看来小鼠的脾脏还可以哈~我去问我们实验室的老师，他们说用流式分选的方法分选Treg不能保证效果~后来就买了磁珠~~
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期待幸福
5楼2013-06-18 14:33:26
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simonforever

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 磨砂雨2010 at 2013-06-18 14:33:26
谢谢~我是想分选出来之后再上流式看细胞比例变化~~
那看来小鼠的脾脏还可以哈~我去问我们实验室的老师，他们说用流式分选的方法分选Treg不能保证效果~后来就买了磁珠~~...

不知道为什么要分选出来
一般分选出来是要培养的
流式分选效果不错，细胞没有什么损伤
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6楼2013-06-19 14:02:18
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磨砂雨2010

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by simonforever at 2013-06-19 14:02:18
不知道为什么要分选出来
一般分选出来是要培养的
流式分选效果不错，细胞没有什么损伤...

主要是想看相关细胞系中的蛋白~~
谢谢了~~
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期待幸福
7楼2013-06-19 15:03:14
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sibaishou

新虫 (小有名气)
不知道各位有没有买磁珠的，我想做间充质干细胞，cd11b抗体，不知道有没有做过的，那家公司做的比较好呢，要求是重力分离
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8楼2013-08-30 13:51:33
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