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colaes

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落pcr

什么条带都没P出来 连引物二聚体都没有  ~~是什么原因啊？
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1楼 2013-03-09 16:49:09
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

第一、做对照
第二、对照有不加菌液，加已知模板的就行了
这样有对照就比较容易判断
我感觉引物的问题应该不是很大，问题应该出在其他方面。
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
7楼2013-04-24 15:57:04
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 说得太对了 2013-03-09 21:45:37
这种时候应该记得设置对照，包括阳性对照和阴性对照。
比如，可以去借一对儿别人已经P出来东西的引物，如果还是不出来，就怀疑是你的体系有问题（引物设计？ Taq酶失活？少加了某种组分？）
另外给你个建议，应该把实验步骤和胶图贴上来，更有利于问题的解决。我曾经见过有忘了加核酸染料的……
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2楼2013-03-09 19:04:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-10 09:32:30
每次实验的对照不是浪费，不仅是结果更加可信，出了问题也方便分析。2L说的对，没有对照的话很难确定到底是哪里的问题。
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3楼2013-03-10 04:20:22
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-09 19:04:49
这种时候应该记得设置对照，包括阳性对照和阴性对照。
比如，可以去借一对儿别人已经P出来东西的引物，如果还是不出来，就怀疑是你的体系有问题（引物设计？ Taq酶失活？少加了某种组分？）
另外给你个建议，应该 ...

打字太快，说错了一点。
如果用别人的引物，还是不出，可能是体系问题；
如果直接借用别人的体系或者商用的Mix，自己的引物不出，有可能是引物设计问题；
忘记加染料的问题，可以通过能不能看到maker来判断；
另外，关于菌落PCR，是G+还是G- ？ 为了保证彻底破壁，可以在使用之前用溶菌酶处理一会儿，或者用水煮一下，再进行PCR
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4楼2013-03-10 14:38:42
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