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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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colaes

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落pcr

什么条带都没P出来 连引物二聚体都没有  ~~是什么原因啊?
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-09 19:04:49
这种时候应该记得设置对照,包括阳性对照和阴性对照。
比如,可以去借一对儿别人已经P出来东西的引物,如果还是不出来,就怀疑是你的体系有问题(引物设计? Taq酶失活?少加了某种组分?)
另外给你个建议,应该 ...

打字太快,说错了一点。
如果用别人的引物,还是不出,可能是体系问题;
如果直接借用别人的体系或者商用的Mix,自己的引物不出,有可能是引物设计问题;
忘记加染料的问题,可以通过能不能看到maker来判断;
另外,关于菌落PCR,是G+还是G- ? 为了保证彻底破壁,可以在使用之前用溶菌酶处理一会儿,或者用水煮一下,再进行PCR
4楼2013-03-10 14:38:42
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查看全部 7 个回答

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 说得太对了 2013-03-09 21:45:37
这种时候应该记得设置对照,包括阳性对照和阴性对照。
比如,可以去借一对儿别人已经P出来东西的引物,如果还是不出来,就怀疑是你的体系有问题(引物设计? Taq酶失活?少加了某种组分?)
另外给你个建议,应该把实验步骤和胶图贴上来,更有利于问题的解决。我曾经见过有忘了加核酸染料的……
2楼2013-03-09 19:04:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-10 09:32:30
每次实验的对照不是浪费,不仅是结果更加可信,出了问题也方便分析。2L说的对,没有对照的话很难确定到底是哪里的问题。
3楼2013-03-10 04:20:22
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wenzi6337

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-12 07:10:49
菌落PCR可以选择载体上引物P一个看看,说不定就是没连上。
5楼2013-03-11 11:56:34
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