应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 从头设计引物克隆全长基因
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 2779  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 从头设计引物克隆全长基因

我的序列是未知的，我先做了保守区克隆+3'race+5'race，然后将他们拼接起来，去掉属于质粒和RACE试剂盒的区段，得到拼接序列。我现在想从头设计引物来克隆这个序列。验证一下拼接结果。5'端引物打分还行，3'端结尾打分都比较低。并且还有个POLY A尾十几个A。有这方面经验的虫友指点我下，该怎么做呢。谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2013-03-07 10:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

___戊_

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2013-03-11 09:40:29
呵呵，如果想早点出结果，经费也不是很紧张的的话，就它吧，如果准备工作做得好的话，一次就出来结果了！...

哎。。。以前我是花钱大户啊  自从前几天没有申请zhibo  你懂的  瞬间地位大降啊~~
赞一下 回复此楼
13楼2013-03-11 15:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

niil

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说实话，这样做没必要。片段经过片段重叠组装到一起，可信度是非常高的，除非你得到的片段重叠区较短。
要做验证的话，可以针对重叠区，在重叠区两端设计引物来验证下重叠区是否可靠。这比从头设计引物容易得多。
赞一下 回复此楼
Stop fighting,let it flow.
2楼2013-03-07 10:50:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by niil at 2013-03-07 10:50:05
说实话，这样做没必要。片段经过片段重叠组装到一起，可信度是非常高的，除非你得到的片段重叠区较短。
要做验证的话，可以针对重叠区，在重叠区两端设计引物来验证下重叠区是否可靠。这比从头设计引物容易得多。

可是，我还要做表达，以及这个基因功能的研究。所以才准备做全长基因克隆的。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-07 11:40:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niil

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
fengyunqb: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-08 09:18:27
fengyunqb: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-04-22 16:24:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengyunqb at 2013-03-07 11:40:05
可是，我还要做表达，以及这个基因功能的研究。所以才准备做全长基因克隆的。...

那这样的话，在ORF两端设计引物，就是扩起始密码和终止密码之间的片段就行。
引物的位置不用严格限定位于这两个位点，能在ORF外侧设计引物最好，要是在ORF内侧设计引物，与起始密码和终止密码差个10-20bp没有问题，引物稍微长一点，把这个片段克隆出来之后，再进行表达载体构建，这时候把缺失的碱基通过引物设计的方法补上在以克隆出来的片段为模板获得完整的ORF。
引物设计软件的得分虽然是衡量标准，但是得分低并不是意味着这个片段扩不出来。尤其是定点设计引物的时候，有矛盾也只能退而求次了。
赞一下 回复此楼
Stop fighting,let it flow.
4楼2013-03-07 12:02:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求调剂 +3 0857求调剂. 2026-03-24 3/150 2026-03-27 01:18 by 求知若渴lz
[考研] 食品工程专硕求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 3/150 2026-03-27 01:14 by dgnhs
[考研] 287求调剂 +7 land xuxu 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:44 by wxiongid
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +4 minht 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:14 by barlinike
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 312求调剂 +8 上岸吧ZJY 2026-03-22 12/600 2026-03-26 18:49 by muchong357
[考研] 调剂推荐 +4 清酒714 2026-03-26 5/250 2026-03-26 17:49 by fmesaito
[考研] 275求调剂 +9 Micky11223 2026-03-25 11/550 2026-03-26 15:54 by 不吃魚的貓
[考研] 26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +3 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:22 by xcjcqu
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭