| 查看: 2779 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
从头设计引物克隆全长基因
|
||
| 我的序列是未知的，我先做了保守区克隆+3'race+5'race，然后将他们拼接起来，去掉属于质粒和RACE试剂盒的区段，得到拼接序列。我现在想从头设计引物来克隆这个序列。验证一下拼接结果。5'端引物打分还行，3'端结尾打分都比较低。并且还有个POLY A尾十几个A。有这方面经验的虫友指点我下，该怎么做呢。谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有155人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
12楼2013-03-11 09:40:29
niil
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 6673.5
- 红花: 3
- 帖子: 835
- 在线: 233.2小时
- 虫号: 876426
- 注册: 2009-10-18
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
2楼2013-03-07 10:50:05
3楼2013-03-07 11:40:05
niil
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 6673.5
- 红花: 3
- 帖子: 835
- 在线: 233.2小时
- 虫号: 876426
- 注册: 2009-10-18
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
fengyunqb: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-08 09:18:27
fengyunqb: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-04-22 16:24:30
fengyunqb: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-08 09:18:27
fengyunqb: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-04-22 16:24:30
|
那这样的话，在ORF两端设计引物，就是扩起始密码和终止密码之间的片段就行。 引物的位置不用严格限定位于这两个位点，能在ORF外侧设计引物最好，要是在ORF内侧设计引物，与起始密码和终止密码差个10-20bp没有问题，引物稍微长一点，把这个片段克隆出来之后，再进行表达载体构建，这时候把缺失的碱基通过引物设计的方法补上在以克隆出来的片段为模板获得完整的ORF。 引物设计软件的得分虽然是衡量标准，但是得分低并不是意味着这个片段扩不出来。尤其是定点设计引物的时候，有矛盾也只能退而求次了。 |
4楼2013-03-07 12:02:45
