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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 中药学 » 液相色谱
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leitianli

金虫 (小有名气)

[求助] 液相色谱

在HPLC中，若用梯度洗脱，如何才能减小基线漂移？
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不为失败找借口，只为成功找出路
1楼 2013-03-06 11:53:13
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jwr

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
PSA: 金币+1, 3u 2013-03-06 16:00:14
1、梯度过度要缓。
2、是否有漂移，漂移多少，是否影响实验结果都需要自己多次试验摸索。
3、祝好运！
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2013-03-06 15:56:44
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yaolan123

禁虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leitianli: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-03-06 22:24:13
原因与解决方法：1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。） 1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。 3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸） 4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。 5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。 6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂 8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。 9、使用循环溶剂，但检测器未调整。9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。 10、检测器没有设定在最大吸收波长处。10、将波长调整至最大吸收波长处
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微微一笑
3楼2013-03-06 16:46:13
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装水的水杯

捐助贵宾 (著名写手)

能把事情做成的人才是牛人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
3楼回复的真是全啊，不过，重点不突出

基线漂移是因为油相是由末端吸收的，甲醇205nm,乙腈190nm。所以，你在用甲醇做梯度检测的时候，如果波长是205nm附近，肯定会有基线漂移的。建议，将波长调的稍微高一点，或者用乙腈做油相来跑，这样基本不会有问题了
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一定时时记得自己在做什么
4楼2013-03-06 17:01:34
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leitianli

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 装水的水杯 at 2013-03-06 17:01:34
3楼回复的真是全啊，不过，重点不突出

基线漂移是因为油相是由末端吸收的，甲醇205nm,乙腈190nm。所以，你在用甲醇做梯度检测的时候，如果波长是205nm附近，肯定会有基线漂移的。建议，将波长调的稍微高一点，或 ...

嘿嘿，明白了，但还是要用甲醇做有机相，乙腈还是造价挺高的
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不为失败找借口，只为成功找出路
5楼2013-03-06 22:27:51
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leitianli

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jwr at 2013-03-06 15:56:44
1、梯度过度要缓。
2、是否有漂移，漂移多少，是否影响实验结果都需要自己多次试验摸索。
3、祝好运！

嘿嘿，谢了
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不为失败找借口，只为成功找出路
6楼2013-03-06 22:29:04
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wzf841006

木虫 (著名写手)
有机相用乙腈，基线会好很多！
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看风
7楼2013-03-07 10:45:45
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Keydream

木虫 (正式写手)
看看
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8楼2013-03-07 11:54:08
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