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qwky2010

金虫 (著名写手)

[求助] RACE原理真诚求指教

看了好几个版本的3`和5`RACE原理,还是很迷惑,求达人指点
还是搞不清楚几个问题,
1、所说的末端未知序列到底是那一段序列,比如说3`RACE,说是该末端有个ploy(A)尾巴,未知序列指的就是尾巴前面的一段序列?而mRNA通常不都是已知的吗,还扩增这末端?什么情况下未知呢?
2、下图所诉原理,中搞不懂为什么设计最上面那3个锚定引物,有的地方称内外侧引物,若说上面我描述的未知末端位置是对的,那下面图中一直用一个基因特异性引物和一个锚定引物进行几轮PCR,不可以吗?
3、5`末端指哪里呢,原理也不清楚呀?

未命名.jpg

[ Last edited by qwky2010 on 2013-3-6 at 11:07 ]
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qwky2010

金虫 (著名写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by niil at 2013-03-06 12:28:23
关于RACE的方法,是有来历的。在很多的实验里面,比如cDNA文库的构建、同源克隆等,获得的cDNA片段通常都是部分的,而cDNA的两个末端是未知的,也就是5'末端和3'末端,末端难以克隆是因为PCR技术的局限性,PCR要克隆 ...

万分感激了
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3楼2013-03-06 13:21:13
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