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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：菌落PCR条带弱且拖尾是怎么回事啊？
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听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
theSubtleAir: 金币+3, ★有帮助 2013-03-17 22:52:45
如果是菌落PCR，看样子大部分是了。拖尾或者条带很细，是PCR跑得不好吧。
选几个阳性克隆，确保正确性，可以再做一次克隆 PCR

最好有阳性对照，否则没啥可比性
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开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
11楼2013-03-06 23:08:05
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无为书生

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by theSubtleAir at 2013-03-06 14:23:14
不是的啊，我后面要做酶切，条带不好就切不成的啊...

可以用PCR产物在扩一次，再回收。
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12楼2013-03-07 09:15:38
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无为书生

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 海之子211 at 2013-03-06 14:42:44
菌提取DNA用的什么方法？检测DNA提取量和纯度？

提基因组用酚氯仿法，当然还有试剂盒，检测最简单的方法就是琼脂糖凝胶了，跟marker比。
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13楼2013-03-07 09:19:03
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zltj2008

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
theSubtleAir: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2013-03-17 22:52:56
引用回帖:
9楼: Originally posted by theSubtleAir at 2013-03-06 14:23:14
不是的啊，我后面要做酶切，条带不好就切不成的啊...

一般来说，提高点退火温度就可以了。不过既然后面要做酶切，你也够懒的，还用菌落PCR，就规规矩矩提个质粒，然后再做呗
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14楼2013-03-07 09:25:58
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梁亮大帝

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
theSubtleAir: 金币+2, ★有帮助 2013-03-17 22:53:03
条带弱，可能是DNA太少了。拖尾，可能是有杂DNA，也可能是胶太稠。我估计的，不一定对。
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爱科学，爱技术，爱真理，爱自己。
15楼2013-03-07 09:43:46
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weishu杯子

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 海之子211 at 2013-03-06 14:42:44
菌提取DNA用的什么方法？检测DNA提取量和纯度？

质粒提取，  跑琼脂糖胶 ，OD仪测量提取量。
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快乐源于生活!!
16楼2013-03-07 12:38:50
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海之子211

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
theSubtleAir: 金币+2, ★有帮助 2013-03-17 22:53:11
引用回帖:
13楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-07 09:19:03
提基因组用酚氯仿法，当然还有试剂盒，检测最简单的方法就是琼脂糖凝胶了，跟marker比。...

用酚氯仿法提基因组，有tag酶抑制剂，pcr效果不好。可以提纯dna
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17楼2013-03-07 15:49:12
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
theSubtleAir: 金币+2, ★有帮助 2013-03-17 22:53:17
菌量太大，下次少来点
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18楼2013-03-07 15:56:23
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云中鸿雁

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
theSubtleAir: 金币+2 2013-03-17 22:53:22
是不是酶加的多少的问题，PCR的程序咋样，退火温度咋样？
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19楼2013-03-07 17:18:33
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