| 查看: 2520 | 回复: 10 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
Jane19900526金虫 (初入文坛)
|
[求助]
赤霉菌原生质体制备，制不出来，求大神帮助~~~急~~~
|
|
|
我最近一直在做赤霉菌原生质体制备，参考的是张文宣 赵南 朱江萍的赤霉素产生菌原生质体制备、纯化与再生工艺的研究，按照他的方法，配制2%纤维素酶，1%蜗牛酶和0.1%溶菌酶，用的溶液是高渗溶液（0.7M NaCl），酶液用0.2μm水系滤膜过滤待用。 做过（1）赤霉菌平板上的菌丝直接加到酶液中放在30℃恒温箱中酶解（适当振荡），每隔0.5h用油镜观察。 （2）液体培养基培养24h后，用4层擦镜纸过滤得孢子悬液，7000rpm离心10min之后，用高渗溶液洗涤2次之后，用高渗溶液重悬，取一定量到酶液中放在30℃恒温箱中酶解（适当振荡），由于放在载玻片上不能使液体干了之后观察，加入香柏油之后油镜观察看到圆形物质，学长说是气泡，所以直接用相差显微镜观察，每隔0.5h观察，观察了5h都没有发现圆形或球形。。。 （3）所以我以为是酶液的浓度不够，还有孢子的细胞壁比菌丝的细胞壁厚，我配制了4%纤维素酶，2%蜗牛酶，重复上述步骤，还是观察不到原生质体。。。 （上述都在无菌环境下进行） 不知道是什么原因，请大神指点迷津，万分感激！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
人气不行了
已经有10人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有6人回复
-
我面上完蛋了
已经有10人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有24人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有17人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有6人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有19人回复
-
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有16人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有21人回复
-
估计是周四
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 链霉菌原生质体制备及融合育种求助
已经有5人回复
- 霉菌原生质体制备中纤维素酶的溶解问题
已经有9人回复
- 链霉菌原生质体法转化容易吗？
已经有5人回复
zhqw423
木虫 (著名写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3280.5
- 散金: 521
- 红花: 5
- 沙发: 3
- 帖子: 1297
- 在线: 138.7小时
- 虫号: 457748
- 注册: 2007-11-12
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
4楼2013-03-05 10:02:31
Jane19900526
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1326.8
- 帖子: 17
- 在线: 11.8小时
- 虫号: 2307787
- 注册: 2013-02-28
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
2楼2013-03-04 12:04:43
zhqw423
木虫 (著名写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3280.5
- 散金: 521
- 红花: 5
- 沙发: 3
- 帖子: 1297
- 在线: 138.7小时
- 虫号: 457748
- 注册: 2007-11-12
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
|
我看过这方面的资料，但自己还没开始做，不过看了你的操作，可以给你一点建议： 1. 菌丝采用对数期菌丝，培养24h可能有点短，你要保证开始有足够的菌丝量（用新鲜菌丝比活化的孢子好些，可以多培养几瓶，镜检菌丝形态确定）； 2. 4层擦镜纸过滤，可能太厚了，因为真菌无论菌丝还是孢子都比较粗大，我们平常过滤放线菌也就用2层擦镜纸，你用4层，可能收集到的菌丝量会很少（可以对滤液进行镜检确定一下），过滤前，可以加入玻璃珠对菌丝振荡一下，将菌丝打成片段，这样肯那个会好些； 3. 赤霉菌本身在40倍下即可观察，其原生质体直径应该比菌丝直径大些，所以你用相差显微镜在40倍下应该就可以清楚观察到，不必使用油镜（避免油中水泡干扰）。 4.实在不确定，你就放到高渗再生平板上，看能否再生。 一些建议，希望对你有帮助。 |
3楼2013-03-05 09:59:47
Jane19900526
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1326.8
- 帖子: 17
- 在线: 11.8小时
- 虫号: 2307787
- 注册: 2013-02-28
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
5楼2013-03-05 11:47:54
20