24小时热门版块排行榜    

查看: 4067  |  回复: 23

321原上草123

新虫 (初入文坛)

你看一下pET28的图谱,SacI和HindIII的酶切位点是挨着的,这样双酶切基本上切不开,因为中间没有足够数量的保护碱基,空间位阻和其他因素会使一种酶失去作用。建议分步酶切。酶切时去磷酸化,以防止载体自连,另外连接前50℃,30min,冰上5min后连接,防止载体自连,然后连接。目的片段很少也能连接。
21楼2013-12-29 17:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1362544291

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
20楼: Originally posted by hxd_715 at 2013-12-02 15:06:07
您好!我现在也在做PET28a的连接实验,请问一下您:你的目的片段和载体连接以后,转化的感受态是那种?还有转板以后多长时间长出的菌落?非常感谢!!!我的目的片段2KB左右,用的感受态是DH5α,转化以后2天才长出 ...

2天才长出菌落不能要了,肯定是杂菌,没有摇起来是给你省事了,不用提质粒,我碰到板子18h长起来,挑菌后也可摇起来,但就是提不出质粒,加溶液III后没见絮状沉淀!直接一片浑浊!
能DH5a 2-16h就可以挑菌了!
22楼2015-08-31 21:46:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1362544291

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 321原上草123 at 2013-12-29 17:58:15
你看一下pET28的图谱,SacI和HindIII的酶切位点是挨着的,这样双酶切基本上切不开,因为中间没有足够数量的保护碱基,空间位阻和其他因素会使一种酶失去作用。建议分步酶切。酶切时去磷酸化,以防止载体自连,另外连 ...

能切开,不然载体图谱不会这样设计!我做过相邻酶切位点的双酶切,分步酶切就ok了!也不用去磷酸化!阳性概率是80%,我挑10个菌落pcr8个对,其中选3个提质粒双酶切都对!
23楼2015-08-31 21:50:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1362544291

新虫 (初入文坛)

做不出来时再多对照都没有!能做出来根本不用这么多对照!从头开始吧~
24楼2015-08-31 21:52:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 witeness 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +7 26研0 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:06 by ColorlessPI
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 310求调剂 +3 baibai1314 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:56 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
信息提示
请填处理意见