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tjulxy

铁虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 1837630
注册: 2012-05-28
性别: MM
专业: 环境污染化学

[求助] 做DGGE所用取代EB的荧光染料应为SYBR Green 1 还是SYBR Green 2 已有2人参与

求助各位大神

：
   由于EB的毒性大，实验室打算用SYBR Green 取代EB做DGGE。对于微生物样品，经过DNA提取-PCR，在DGGE时应该用SYBR Green 1 还是SYBR Green 2染色？
   我们看过SYBR Green 1的使用说明，上面主要介绍了琼脂糖凝胶电泳的染色方面（点染法和胶染法），对于聚丙烯酰胺电泳应该用什么方法染色，具体的操作步骤是什么？
   如果提取DNA后，进行实时定量PCR应该用上面那个荧光染料呢？

实验室主要做环境方面的研究，对于分子生物学方面的知识非常欠缺，还望有经验的大神不吝赐教。非常感谢！

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前路艰辛，努力拼搏

1楼 2013-02-27 22:20:49

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muji9908

铁虫 (小有名气)

应助: 22 (小学生)
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虫号: 2789315
注册: 2013-11-09
专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
tjulxy: 金币+10, ★★★很有帮助, 多谢多谢，好久没登录了，竟然得到这么完整的答案 2014-03-19 19:18:41

SYBRI, SYBR II 是染RNA的
有三种染色方法：
胶染，在做胶的时候加在胶里。按1:10 000稀释
点染，在加样的时候加在样品里。每个样本1 ul 1 in100 SYBR I
后染（泡染），跑完胶后，把胶放在足够的1xTAE buffer 里，然后震荡15分钟。 1x TAE buffer 里加入 1 in10 000 SYBR I
三种方法，胶染效果最好（但可能与某些loading dye 不兼容），点染最省。