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mlyhhh

木虫 (小有名气)

[求助] 请问miRNA靶基因验证时怎么突变靶基因的3‘UTR结合位点

例如:靶基因和miRNA的结合位点序列为:CAUUUCA,那应该怎么突变,不知道是突变其中一个还是几个碱基。看文献有的只突变1个碱基,有的突变2个碱基,不知道有没有什么原则。
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lhs521521

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangxn at 2013-11-27 16:35:04
请问你是怎么把中间的五个碱基突变的?有没有protocol 可以发给我看看吗?谢谢!我的邮箱:xiaona0379@163.com...

引物突变法,通过设计引物直接把要突变的碱基换成其他碱基,而其他的该互补的互补,该相同的相同!
寻找真正的自我!
9楼2013-11-29 09:53:18
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yaodadewo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mlyhhh: 金币+10, 有帮助 2013-02-27 09:41:24
我是全突变,这样保险一些,最近刚做的,突变的话,就把C变成T或A,不要突变为互补的
2楼2013-02-26 16:50:32
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mlyhhh

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yaodadewo at 2013-02-26 16:50:32
我是全突变,这样保险一些,最近刚做的,突变的话,就把C变成T或A,不要突变为互补的

我还打算做缺失突变,全突变不就跟缺失突变没啥区别了嘛。
3楼2013-02-26 19:29:05
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mlyhhh: 金币+10, 有帮助, 多谢 2013-02-28 08:52:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by mlyhhh at 2013-02-26 19:29:05
我还打算做缺失突变,全突变不就跟缺失突变没啥区别了嘛。...

只要在seed sequence里面突变1-2个碱基就可以了,你可以参考相关文献,做microRNA的文献非常多
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-02-27 11:08:36
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