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xiaoying1105

铜虫 (初入文坛)

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专业: 药物代谢与药物动力学

[求助] 关于测血药浓度配制标准曲线和血样处理时遇到的困惑~急等答案

本人用HPLC法测某药在人体中的谷浓度

第一种方法：标准曲线的制备：将2g/l的储备液，用甲醇依次倍比稀释到400mg/l,200mg/l,100mg/l……，各吸取20微升加入到180微升空白血浆中，稀释到浓度分别为40mg/l,20mg/l,10mg/l……作为标准曲线上的点，将200微升的空白血浆样品中加入200微升的甲醇涡旋混合1min, 15000r离心10min,吸取上清液25微升进样。
血样处理：吸取服药后人血浆200微升，加入200微升甲醇涡旋混合1min, 15000r离心10min,吸取上清液25微升进样。

第二种方法：标准曲线制备：将2g/l的储备液，用甲醇依次倍比稀释到80mg/l,40mg/l,20mg/l……，各吸取甲醇稀释液200微升，加入200微升的空白血浆，稀释到浓度分别为40mg/l,20mg/l,10mg/l……作为标准曲线上的点，涡旋混合1min, 15000r离心10min,吸取上清液25微升进样。
血样处理：吸取服药后人血浆200微升，加入200微升甲醇涡旋混合1min, 15000r离心10min,吸取上清液25微升进样。

请问各位大侠哪种方法对呢，我参考其他文献貌似采用第一种方法，但测得的峰面积代入标准曲线后得到的浓度值，第一种方法几乎是第二种方法的2倍，如第一种方法测得谷浓度为30mg/l, 第二种方法谷浓度约为15mg/l ，最令我疑惑的是，参考其他文献测得的谷浓度结果一般为15mg/l左右，实在不知问题出在了哪儿呀？
还有加甲醇沉淀蛋白的比例，如果第二种方法配制标准曲线时加入300微升甲醇，血样处理同样加入300微升甲醇，和加入1倍甲醇相比结果会有多大影响？请高手回答~~~~~~~~~~~~`急等答案~

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