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legendkiller银虫 (小有名气)
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[求助]
求助建立逆转录病毒载体颗粒生产细胞系的相关问题
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我最近看到一篇文章是“建立逆转录病毒载体颗粒生产细胞系”的文章，他是先用病毒转化哺乳动物细胞，然后培养获得病毒颗粒，再用此病毒颗粒去感染肿瘤细胞来获得逆转录病毒载体颗粒生产细胞系。 我想问一下，既然哺乳动物细胞能生产该病毒颗粒，为什么还要去感染肿瘤细胞呢 或是为什么不直接感染肿瘤细胞呢 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-02-25 13:34:19
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-02-25 13:34:19
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作为外源基因导入的手段，假病毒颗粒侵染和普通的基因转染有许多不同的特点。 一、假病毒侵染的导入效率要高于转染。这一点在比较容易转染的细胞上可能不明显，但在比较难以转染的细胞上，假病毒侵染就比转染有优势的多，就lz帖中的疑问“为什么不直接感染肿瘤细胞呢？”，许多情况就是因为目的细胞系难以转染，或是转染率不高，不能满足实验的要求（比如基于shRNA的Knock down实验，要求转染率要大于50%，甚至70%），这时候用假病毒侵染就是解决问题的选择之一（一般假病毒颗粒的生产细胞都是易于转染的，比如HEK293）； 二、假病毒侵染导入的基因转录/表达的持续性要高于转染。一般假病毒导入的基因，不易被宿主丢失，不仅在瞬时转染的实验中，基因转录/表达的持续时间长（比如Knockdown实验中，假病毒侵染的Knockdown可以持续1week以上，而普通瞬时转染的Knockdown效果，一般就2-4天，最多也不过10天），在稳定转染的实验中，病毒侵染的细胞获得稳定表达（插入基因组）的效率也要高出普通转染很多。 三、假病毒侵染的灵活性要比普通转染高。比如做体内转染，在比如做特异细胞导入（普通转染是非特异的导入，而假病毒侵染，可以通过改变病毒的包膜蛋白颗粒，而改变其侵染的嗜性，从而做到特异导入）。 假病毒侵染的优势还很多，当然并不是说病毒侵染就多么多么高级，这些都只是手段，根据不同的条件和目的供人选择而已。希望能帮到lz。 |
2楼2013-02-23 12:48:43
legendkiller3楼2013-02-23 13:55:06
legendkiller
银虫 (小有名气)
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4楼2013-02-24 20:33:41
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