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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » p不出条带
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Suzhipeng

铁虫 (小有名气)

[交流] p不出条带

两步法用Primer Star p条带,目的条带为3000+,模板为基因组DNA,条件为94度预变10min,94度30s,68度2min,72度延伸10min,4度保存~但是P不出任何条带,肿么回事呢?
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1楼 2013-02-20 20:34:17
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
Suzhipeng(金币+1): 谢谢参与
楼主的变性退火温度不太合适吧。。。
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2楼2013-02-20 20:47:19
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csdyg

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
Suzhipeng(金币+1): 谢谢参与
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-02-21 08:15:37
提高变性温度至98度，20s
退火温度设置低一些
同时用Taq对照
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4楼2013-02-21 04:00:41
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Suzhipeng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by csdyg at 2013-02-21 04:00:41
提高变性温度至98度，20s
退火温度设置低一些
同时用Taq对照

谢谢分享,试一下~
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5楼2013-02-21 08:45:59
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夏尔list

金虫 (著名写手)
梯度扩
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6楼2013-02-22 10:39:54
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robustli

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
调节退火温度，或用梯度PCR找最合适的温度，比较长得片段可以试一试KOD hot start polymerase, 这种酶1kb只需15-20s,另外你得变性温度好型有点太长了，如果你得模板含有较高的GC，可加DMSO试试
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7楼2013-02-22 10:50:49
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sxxuan

金虫 (著名写手)
Primer Star 的扩增条件不是这样的吧？我用的时候怎么是98℃10s，然后就是退火温度和时间啊，直接多少个循环就可以了吧？
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8楼2013-02-22 14:39:29
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yingying15883楼
2013-02-20 21:25   回复  
Suzhipeng(金币+1): 谢谢参与
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