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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助Clontch的表达载体pECFP -C1中Kozak consensus translation initiation site
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 求助Clontch的表达载体pECFP -C1中Kozak consensus translation initiation site

Clontch的表达载体pECFP -C1说明书中写道：Furthermore, upstream sequences flanking ECFP have been converted to a Kozak consensus translation initiation site .请问这是什么意思，我设计引物时需要怎么做？
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1楼 2013-02-20 14:11:45
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
Kozak consensus translation initiation site: 606–616
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2楼2013-02-20 20:19:38
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Kozak consensus translation initiation site可以增强蛋白翻译效率，因为你用的是pECFP -C1载体，你的目的基因连在ECFP的C末端，所以你不用考虑Kozak consensus translation initiation site，你只需要考虑你的基因能和pECFP-C1融合就可以了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-02-20 22:00:19
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-02-20 22:00:19
Kozak consensus translation initiation site可以增强蛋白翻译效率，因为你用的是pECFP -C1载体，你的目的基因连在ECFP的C末端，所以你不用考虑Kozak consensus translation initiation site，你只需要考虑你的基因 ...

我就只要加这里面的酶切位点就行吗？保护碱基应该怎么加呢？

未命名111.jpg
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4楼2013-02-20 22:04:59
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-02-20 22:00:19
Kozak consensus translation initiation site可以增强蛋白翻译效率，因为你用的是pECFP -C1载体，你的目的基因连在ECFP的C末端，所以你不用考虑Kozak consensus translation initiation site，你只需要考虑你的基因 ...

需要考虑基因能和pECFP-C1融合是指从ATG开始不移码吗？
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5楼2013-02-20 22:07:08
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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5楼: Originally posted by yuguiyan at 2013-02-20 22:07:08
需要考虑基因能和pECFP-C1融合是指从ATG开始不移码吗？...

是说从ECFP的ATG开始一直到你的目的基因的终止密子,整个在一个阅读框上,不发生移码.
你可以直接用的酶切位点有BspEI,BglII, SalI,KpnI,BamHI, 如果用其它的酶切位点需要在目的基因的N端多加几个碱基使之不发生移码.
保护碱基需要根据不同的酶来加,通常3 个保护碱基就可以了.
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北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
6楼2013-02-21 09:24:26
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
6楼: Originally posted by polepolar at 2013-02-21 09:24:26
是说从ECFP的ATG开始一直到你的目的基因的终止密子,整个在一个阅读框上,不发生移码.
你可以直接用的酶切位点有BspEI,BglII, SalI,KpnI,BamHI, 如果用其它的酶切位点需要在目的基因的N端多加几个碱基使之不发生移码 ...

比如我用KpnI，第一行保护碱基的切割率为0，我只能用后两种对吗？

未命名111.jpg
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7楼2013-02-21 11:45:22
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
6楼: Originally posted by polepolar at 2013-02-21 09:24:26
是说从ECFP的ATG开始一直到你的目的基因的终止密子,整个在一个阅读框上,不发生移码.
你可以直接用的酶切位点有BspEI,BglII, SalI,KpnI,BamHI, 如果用其它的酶切位点需要在目的基因的N端多加几个碱基使之不发生移码 ...

KpnI的保护碱基

111111111111111.JPG
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8楼2013-02-21 11:46:43
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polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是的,我通常是加3个以上,加好后的结构如下:
CGGGGTACC-目的基因
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北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
9楼2013-02-21 16:24:38
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
9楼: Originally posted by polepolar at 2013-02-21 16:24:38
是的,我通常是加3个以上,加好后的结构如下:
CGGGGTACC-目的基因

下游引物就不用考虑移码了吧？

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10楼2016-06-14 16:22:47
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