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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 跪求大神指点PCR产物浓度分析
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Camille2010

金虫 (小有名气)

[求助] 跪求大神指点PCR产物浓度分析

如题所示，做这个的目的是想要知道PCR产物的浓度，使用的模板DNA136bp,100ng/ul, 1ul, 不对称PCR 反应体系每管50ul，4管，反应产物取其中20ul稀释1/10后进行梯度琼脂糖凝胶电泳，电泳结果如图所示，Marker往右依次是1ul-5ul，请教大侠，如果只用Marker DNA 对比跑胶结果能大概计算出PCR中模板DNA的浓度么？谢谢
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    • 2013-02-19 05:19:18, 2.99 M

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1楼 2013-02-19 05:19:47
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Camille2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2013-02-19 08:51:51
我想了解楼主的整个实验，关于楼主说的这个方法，没有见过有文献报道，可能是我孤陋寡闻，但是通过电泳来相对定量的倒是有见过

请教一下,先用 信号物质标记forward primer,然后进行PCR,但是PCR产物中这个标记物的信号明显变小甚至基本上没有了,这个标记物很稳定也能耐94高温,会有什么原因导致forward primer没有扩增呢?这是不对称PCR, forward primer 10倍于reverse primer.
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12楼2013-02-28 19:04:37
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reninhat

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Camille2010: 金币+2 2013-02-19 16:12:06
用个紫外检测板，测一下DNA浓度吧。有需要可以联系我哦
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2楼2013-02-19 08:44:32
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Camille2010: 金币+2 2013-02-19 16:12:41
我想了解楼主的整个实验，关于楼主说的这个方法，没有见过有文献报道，可能是我孤陋寡闻，但是通过电泳来相对定量的倒是有见过
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风雪夜归人
3楼2013-02-19 08:51:51
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majily

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-02-19 13:35:29
Camille2010: 金币+2 2013-02-19 16:23:36
只通过有marker对照的电泳结果不能看出 你可以加一个定好量的阳性对照 能根据亮度相对估计一下 但是不保准 最好做一下荧光定量PCR或将条带割胶回收测定DNA浓度，除去损失的话能相对准确的估计一下DNA的含量。
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既然选择了远方就要在风雨中飞翔
4楼2013-02-19 11:12:15
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