10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-15 12:37:03
包涵体中的蛋白是非活性形式的变性蛋白，但不影响SDS-PAGE后做western。...

11楼: Originally posted by qinhuan0425 at 2013-02-15 16:12:19
那么这种情况要怎么处理呢？即使20KD处是我要的蛋白，但没有his标签我纯化不了啊！...

12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-16 07:30:24
western没做出来不一定就没有his-tag，你构建的载体上是带标签的吧。所以我觉得你先鉴定一下20kD的蛋白，如果正确可以试试过一下镍柱看看。如果实在不挂柱的话，可以先分离包涵体。包涵体里面基本上都是目的蛋白， ...

13楼: Originally posted by qinhuan0425 at 2013-02-16 13:15:41
太感谢您了！...

14楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-16 13:30:01
不客气，祝实验顺利。...

15楼: Originally posted by qinhuan0425 at 2013-02-16 19:01:36
可是western做不出来，只有蛋白大小，目的蛋白没有说服力呀！...

16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-17 02:54:43
如果打质谱正确的话不是更有说服力吗。再说，western做不出来有可能是抗体的问题。你可以试试换一家公司的抗体。...

18楼: Originally posted by lying09 at 2013-02-18 09:12:16
目标蛋白上带有His-tag，会使最终的蛋白在电泳条带上偏大