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星星和太阳

金虫 (初入文坛)

[求助] 小鼠胚胎干细胞的贴壁问题。

各位虫友们,是这样,我在培养小鼠胚胎干细胞,在代数比较低的时候,很容易形成EB,贴壁性能很差,随着代数的增加,随着分化,贴壁要稍微好一些,但是还是达不到实验要求,也用明胶处理培养板,现在就是想问一下,和大家交流,明胶处理之后需要用PBS洗培养板吗?明胶对细胞有毒性吗?明胶为什么能促进细胞贴壁?还有什么办法可以促进细胞贴壁啊。
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bluebeder
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美丽传说

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-01-23 08:37:48
直接买贴壁细胞瓶,都是处理好的,如果是用玻璃瓶,需要用明胶处理,没有毒性。此外加大血清含量,也利于细胞贴壁。
2楼2013-01-22 16:56:31
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百奥赛图沈博

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-01-23 08:37:57
最好长在mmc处理的MEF细胞上。如果一定不想用MEF,1%的Gelatin处理平皿也可以的。如果是用PBS溶的,不用洗。但注意gelatin处理的时候不要有蒸发,否则盐浓度太高,会影响细胞生长。

可以肯定地说,用MEF的话,对ES细胞要好的多。如果有MEF,细胞会成丘状,在Gelatin上长得话,细胞colony会长扁平。
3楼2013-01-22 18:59:58
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星星和太阳

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 百奥赛图沈博 at 2013-01-22 18:59:58
最好长在mmc处理的MEF细胞上。如果一定不想用MEF,1%的Gelatin处理平皿也可以的。如果是用PBS溶的,不用洗。但注意gelatin处理的时候不要有蒸发,否则盐浓度太高,会影响细胞生长。

可以肯定地说,用MEF的话,对 ...

嗯,谢谢,我用的Gelatin就是用PBS溶的,下次试试1%的浓度。你说的MEF就是小鼠成纤维细胞吧,滋养层,可是我们实验室没有足够的滋养层细胞,无奈只能用明胶。
bluebeder
4楼2013-01-22 21:19:11
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星星和太阳

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 美丽传说 at 2013-01-22 16:56:31
直接买贴壁细胞瓶,都是处理好的,如果是用玻璃瓶,需要用明胶处理,没有毒性。此外加大血清含量,也利于细胞贴壁。

实验要求,在细胞培养瓶上不能进行啊,没办法,为了促进贴壁,只能用明胶,谢谢了
bluebeder
5楼2013-01-22 21:21:17
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王清洪

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议最好用MEF.明胶浓度可以再小点0.1%
6楼2013-01-24 09:57:06
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星星和太阳

金虫 (初入文坛)

???????:
6?: Originally posted by ????? at 2013-01-24 09:57:06
?????????MEF.????????????С??0.1%

???????????????????????????????????0.1%??????лл?á?
bluebeder
7楼2013-01-24 10:47:33
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空谈误国

金虫 (正式写手)

潜龙勿用

引用回帖:
3楼: Originally posted by 百奥赛图沈博 at 2013-01-22 18:59:58
最好长在mmc处理的MEF细胞上。如果一定不想用MEF,1%的Gelatin处理平皿也可以的。如果是用PBS溶的,不用洗。但注意gelatin处理的时候不要有蒸发,否则盐浓度太高,会影响细胞生长。

可以肯定地说,用MEF的话,对 ...

请教一个问题:明胶包板培养两天后,有一半细胞脱落下来不再贴壁,我接着养了几天,镜下看成球形,类似EB球。这些不贴壁的细胞还是胚胎干细胞吗?还是已经分化了的EB球?
我养的小鼠的胚胎干细胞系。
8楼2016-03-14 11:27:11
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屎味儿咖啡

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 空谈误国 at 2016-03-14 11:27:11
请教一个问题:明胶包板培养两天后,有一半细胞脱落下来不再贴壁,我接着养了几天,镜下看成球形,类似EB球。这些不贴壁的细胞还是胚胎干细胞吗?还是已经分化了的EB球?
我养的小鼠的胚胎干细胞系。...

我也有同样的问题
9楼2023-06-12 09:57:28
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