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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Flag标签融合在N端还是C端？？？？
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匿名

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1楼 2013-01-22 11:41:31
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greenygreen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wickhamhan: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-22 16:29:12
我用的clontech pCMV-Tag2B载体，N端FLAG-tag，目的蛋白140KD，western效果很好。抗体是anti-FLAG monoclonal antibody，Sigma。他家拥有FLAG抗体专利，应该N端C段都可以抗。
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5楼2013-01-22 12:01:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wickhamhan: 金币+2, ★有帮助 2013-01-22 11:48:26
tag加在C端的效果是否好要看不同蛋白吧。做western应该是可以的。关键是要看加tag后是否影响蛋白活性。
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2楼2013-01-22 11:44:53
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匿名

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3楼2013-01-22 11:48:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-22 12:07:21
wickhamhan: 金币+1 2013-01-22 16:29:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by wickhamhan at 2013-01-22 11:48:13
谢谢回复~
因为我要做的这个蛋白是个分泌蛋白，N端的话涉及信号肽，预测的又不是很准，所以，不敢冒险放在N端；但是放在C端，又怕效果不好，同时，还想请教一下，Flag标签的融合，需不需要在Flag前加什么linker之类 ...

FLAG-tag是很小的，一般不需要加linker。除非你的蛋白C端参与重要的蛋白蛋白相互作用。不过我记得好像commercial flag抗体有的是只识别一端的tag，买的时候要注意一下。
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4楼2013-01-22 11:55:40
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