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3楼2013-01-22 11:48:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wickhamhan: 金币+2, 有帮助 2013-01-22 11:48:26
tag加在C端的效果是否好要看不同蛋白吧。做western应该是可以的。关键是要看加tag后是否影响蛋白活性。
2楼2013-01-22 11:44:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-22 12:07:21
wickhamhan: 金币+1 2013-01-22 16:29:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by wickhamhan at 2013-01-22 11:48:13
谢谢回复~
因为我要做的这个蛋白是个分泌蛋白,N端的话涉及信号肽,预测的又不是很准,所以,不敢冒险放在N端;但是放在C端,又怕效果不好,同时,还想请教一下,Flag标签的融合,需不需要在Flag前加什么linker之类 ...

FLAG-tag是很小的,一般不需要加linker。除非你的蛋白C端参与重要的蛋白蛋白相互作用。不过我记得好像commercial flag抗体有的是只识别一端的tag,买的时候要注意一下。
4楼2013-01-22 11:55:40
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greenygreen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wickhamhan: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-22 16:29:12
我用的clontech pCMV-Tag2B载体,N端FLAG-tag,目的蛋白140KD,western效果很好。抗体是anti-FLAG monoclonal antibody,Sigma。他家拥有FLAG抗体专利,应该N端C段都可以抗。
5楼2013-01-22 12:01:47
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