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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 前处理 » 液相色谱分析氨基酸的衍生方法
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axearmy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

做氨基酸分析有一段时间了，各种各样的方法也试过了，仪器也买过了，谈下个人经验
在选取方法之前，我认为首先应该明确目标氨基酸的种类、数量。
如果仅数种氨基酸，如常见的丝、谷、甘、苏、亮、精、鸟，那都不是事儿，OPA、FMOC都没问题（成本低）。需要注意的是这两种衍生都不是很稳定，最好是配合自动进样器进行进样前的自动衍生。（安捷伦和Waters都有标准的自动进样器在线衍生方法，可以参考；PS.推荐用资生堂的MG2柱子，耐受性强一些）
如果加上一些需要二次衍生的就比较麻烦了，特别是半胱，用在线衍生很难保证精密度。可以使用Waters的Accq-tag。这个方法比较稳定，对数量不多的氨基酸也比较有效。最大的缺点是成本较高，连试剂代柱子，每针成本在20块钱左右。另外，也是我不能忍受的一点，对于18种以上的氨基酸分析分离度不好。Waters回应的解决方案是需要买其UPLC-I Class的仪器，仪器和色谱柱的成本都比较以往翻了一番。
无奈于Waters欺负人的行为，花60万买了一台赛卡姆的氨基酸分析仪，结果也没比i Class的UPLC便宜多少。不过现在可以做25种氨基酸的分析了，重现性也比之前有大幅提高。也算比Waters的要强一些。
氨基酸分析仪其实也是HPLC的专业细分产物，主要是利用可控的自动柱前和柱后两次衍生，配合离子交换色谱柱来分离和检测。现在国内市面上的氨基酸分析仪主要是日本日立、英国百康、和赛卡姆三家，日立的要好一些，价格也很贵。同时，还分蛋白水解系统和生理体液系统。蛋白水解的能同时分17种氨基酸，生理体液的最多能分30~34种。目前用了一年，使用进口试剂每针要十几块，国产试剂有一点小干扰，但成本只有不到一块。
另外一种方法也实验了一下，但是没有做下去。就是用离子色谱仪来做。基本上要戴安的ICS3000或5000才可以，因为需要走梯度。期初分离还不错，重现性也行，但是因为进样浓度高，柱子没进到几百针就不行了。再买柱子要一万多，而且到货时间长达一个半月，就放弃了。
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11楼2014-05-17 17:11:56
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