10楼: Originally posted by ym6104 at 2013-01-10 23:02:18
直接测序指的是PCR产物直接测还是说把菌液拿去呢？...

11楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-10 23:14:41
要是提了质粒就送质粒，没有的话送菌液就行了哇...

3楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-10 21:05:10
你做菌落PCR用的什么引物啊？如果是和克隆一样的引物是有可能扩不出来的，从质粒上扩出3000和从菌液中扩出3000还是会有点差别的
一般做菌落PCR一端用载体上的通用引物一端用片段上的引物，片段小一些保证效率
比如 ...

13楼: Originally posted by draco1987 at 2013-01-11 11:23:22
我也来补充一下，TA克隆是不分方向连接的，如果楼主只是要测序验证一下，可以考虑可以把片段反向连进载体的情况也考虑进去，但是这样就会有4对引物组合要检测
其实pMD19-T载体本身不大，连3000bp的片段有些力 ...

14楼: Originally posted by 植物园园长 at 2013-01-11 16:00:31
如果克隆测序，建议试试天根的零背景克隆载体，3k片段没问题的，最长都连过8k片段呢。

17楼: Originally posted by 不倒帆 at 2013-01-16 12:54:50
片段长就多连会儿，12个小时！我的2000bp的，不知能不能连上。