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ccharlien

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ym6104 at 2013-01-10 23:02:18
直接测序指的是PCR产物直接测还是说把菌液拿去呢？...

要是提了质粒就送质粒，没有的话送菌液就行了哇
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11楼2013-01-10 23:14:41
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-10 23:14:41
要是提了质粒就送质粒，没有的话送菌液就行了哇...

十分感谢哇
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12楼2013-01-11 09:33:13
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draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-10 21:05:10
你做菌落PCR用的什么引物啊？如果是和克隆一样的引物是有可能扩不出来的，从质粒上扩出3000和从菌液中扩出3000还是会有点差别的
一般做菌落PCR一端用载体上的通用引物一端用片段上的引物，片段小一些保证效率
比如 ...

我也来补充一下，TA克隆是不分方向连接的，如果楼主只是要测序验证一下，可以考虑可以把片段反向连进载体的情况也考虑进去，但是这样就会有4对引物组合要检测
其实pMD19-T载体本身不大，连3000bp的片段有些力不从心，楼主如果以后还要继续大量搞，还是尽快改变策略吧，要么分段连，要么换别的合适的载体。
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13楼2013-01-11 11:23:22
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植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果克隆测序，建议试试天根的零背景克隆载体，3k片段没问题的，最长都连过8k片段呢。
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在路上～～Marketing!
14楼2013-01-11 16:00:31
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by draco1987 at 2013-01-11 11:23:22
我也来补充一下，TA克隆是不分方向连接的，如果楼主只是要测序验证一下，可以考虑可以把片段反向连进载体的情况也考虑进去，但是这样就会有4对引物组合要检测
其实pMD19-T载体本身不大，连3000bp的片段有些力 ...

谢谢你，我也一直在考虑换个载体，有什么好建议吗？
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15楼2013-01-11 17:42:04
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 植物园园长 at 2013-01-11 16:00:31
如果克隆测序，建议试试天根的零背景克隆载体，3k片段没问题的，最长都连过8k片段呢。

如果还不行的话，考虑换换，谢谢哦
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16楼2013-01-11 17:42:34
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不倒帆

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

片段长就多连会儿，12个小时！我的2000bp的，不知能不能连上。
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17楼2013-01-16 12:54:50
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ym6104

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 不倒帆 at 2013-01-16 12:54:50
片段长就多连会儿，12个小时！我的2000bp的，不知能不能连上。

连的时间都超过12个小时了。。。还在想办法，没出结果
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18楼2013-01-17 10:25:40
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