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494750284

木虫 (小有名气)

[求助] 转染处理

转染一个miRNA mimic,观察期对我目的蛋白表达的影响(细胞周期蛋白),用的是瞬时转染,现在遇到一个问题,转染后的培养基到底是维持液还是10%FBS的培养基???
最好说说原因或者给个参考文献!

[ Last edited by 494750284 on 2013-1-9 at 10:17 ]
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淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
494750284: 金币+5, ★★★很有帮助, 追问一下,您做没做过A549转染? 2013-01-10 14:39:18
我经常做siRNA的转染,使用Lipofectamine2000和OPTI-MEM,一般核酸转染复合物的稳定时间在6h左右,所以转染6h后即可将Opti-Mem换成全培养基,希望对你有帮助。另外你做细胞周期蛋白最好还是换回全培养基,营养条件不好对你的实验会有较大影响
6楼2013-01-09 21:32:58
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井鱼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
494750284: 金币+2, 有帮助 2013-01-10 14:37:23
看你用的什么试剂转染的,有的试剂对细胞有毒性,应该6h 后换液,毒性小的话,也可以不换液。
2楼2013-01-09 11:16:17
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
494750284: 金币+2, 有帮助 2013-01-10 14:37:49
不建议用FBS,其中的酶会加速你的mRNA分解。
shine
3楼2013-01-09 12:12:38
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494750284

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 井鱼 at 2013-01-09 11:16:17
看你用的什么试剂转染的,有的试剂对细胞有毒性,应该6h 后换液,毒性小的话,也可以不换液。

我的是lipo2000,换不换液都是可以的,我现在弄不准的是加多少浓度的培养基。我的是瞬转,看我的miRNA对细胞周期的影响。
4楼2013-01-09 16:01:06
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