24小时热门版块排行榜    

查看: 1668  |  回复: 11

494750284

木虫 (小有名气)

[求助] 转染处理

转染一个miRNA mimic,观察期对我目的蛋白表达的影响(细胞周期蛋白),用的是瞬时转染,现在遇到一个问题,转染后的培养基到底是维持液还是10%FBS的培养基???
最好说说原因或者给个参考文献!

[ Last edited by 494750284 on 2013-1-9 at 10:17 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

井鱼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
494750284: 金币+2, 有帮助 2013-01-10 14:37:23
看你用的什么试剂转染的,有的试剂对细胞有毒性,应该6h 后换液,毒性小的话,也可以不换液。
2楼2013-01-09 11:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
494750284: 金币+2, 有帮助 2013-01-10 14:37:49
不建议用FBS,其中的酶会加速你的mRNA分解。
shine
3楼2013-01-09 12:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

494750284

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 井鱼 at 2013-01-09 11:16:17
看你用的什么试剂转染的,有的试剂对细胞有毒性,应该6h 后换液,毒性小的话,也可以不换液。

我的是lipo2000,换不换液都是可以的,我现在弄不准的是加多少浓度的培养基。我的是瞬转,看我的miRNA对细胞周期的影响。
4楼2013-01-09 16:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

494750284

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-09 12:12:38
不建议用FBS,其中的酶会加速你的mRNA分解。

您说的不建议用FBS是转染前还是转染之后啊??另外有个小问题,FBS中有酶?
5楼2013-01-09 16:03:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
494750284: 金币+5, ★★★很有帮助, 追问一下,您做没做过A549转染? 2013-01-10 14:39:18
我经常做siRNA的转染,使用Lipofectamine2000和OPTI-MEM,一般核酸转染复合物的稳定时间在6h左右,所以转染6h后即可将Opti-Mem换成全培养基,希望对你有帮助。另外你做细胞周期蛋白最好还是换回全培养基,营养条件不好对你的实验会有较大影响
6楼2013-01-09 21:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxiongbao

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们都是换液的。。。。可能是转染系统不一样吧  因人而异。。。
得不到的永远在骚动
7楼2013-01-09 23:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

494750284

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yuxiongbao at 2013-01-09 23:21:24
我们都是换液的。。。。可能是转染系统不一样吧  因人而异。。。

换维持液还是10%的?
8楼2013-01-10 14:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxiongbao

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
494750284: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-10 22:46:05
我们一般 都做时间点的
得不到的永远在骚动
9楼2013-01-10 22:30:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

494750284

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by yuxiongbao at 2013-01-10 22:30:58
我们一般 都做时间点的

可以具体说说吗?说一下您的大概步骤。比如siRNA转染→换液(培养基浓度?)→培养(您所说的时间点?)→流式检测。多谢了,如果觉得麻烦,推荐篇文献也可以
10楼2013-01-10 22:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 494750284 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +3 布布和一二 2026-08-08 3/150 2026-08-08 18:15 by Lightingo
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 17:02 by oEVWOejN9taj
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[基金申请] fileCode有新解读? +9 Tide man 2026-08-08 17/850 2026-08-08 14:56 by archvillain
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +5 布布和一二 2026-08-08 8/400 2026-08-08 14:54 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见