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494750284

木虫 (小有名气)

[求助] 转染处理

转染一个miRNA mimic，观察期对我目的蛋白表达的影响（细胞周期蛋白），用的是瞬时转染，现在遇到一个问题，转染后的培养基到底是维持液还是10%FBS的培养基？？？
最好说说原因或者给个参考文献！

[ Last edited by 494750284 on 2013-1-9 at 10:17 ]
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1楼 2013-01-09 10:14:11
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井鱼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
494750284: 金币+2, ★有帮助 2013-01-10 14:37:23
看你用的什么试剂转染的，有的试剂对细胞有毒性，应该6h 后换液，毒性小的话，也可以不换液。
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2楼2013-01-09 11:16:17
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
494750284: 金币+2, ★有帮助 2013-01-10 14:37:49
不建议用FBS，其中的酶会加速你的ｍＲＮＡ分解。
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shine
3楼2013-01-09 12:12:38
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494750284

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 井鱼 at 2013-01-09 11:16:17
看你用的什么试剂转染的，有的试剂对细胞有毒性，应该6h 后换液，毒性小的话，也可以不换液。

我的是lipo2000，换不换液都是可以的，我现在弄不准的是加多少浓度的培养基。我的是瞬转，看我的miRNA对细胞周期的影响。
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4楼2013-01-09 16:01:06
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494750284

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-09 12:12:38
不建议用FBS，其中的酶会加速你的ｍＲＮＡ分解。

您说的不建议用FBS是转染前还是转染之后啊？？另外有个小问题，FBS中有酶？
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5楼2013-01-09 16:03:12
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淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
494750284: 金币+5, ★★★很有帮助, 追问一下，您做没做过A549转染？ 2013-01-10 14:39:18
我经常做siRNA的转染，使用Lipofectamine2000和OPTI-MEM，一般核酸转染复合物的稳定时间在6h左右，所以转染6h后即可将Opti-Mem换成全培养基，希望对你有帮助。另外你做细胞周期蛋白最好还是换回全培养基，营养条件不好对你的实验会有较大影响
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6楼2013-01-09 21:32:58
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yuxiongbao

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们都是换液的。。。。可能是转染系统不一样吧  因人而异。。。
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得不到的永远在骚动
7楼2013-01-09 23:21:24
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494750284

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yuxiongbao at 2013-01-09 23:21:24
我们都是换液的。。。。可能是转染系统不一样吧  因人而异。。。

换维持液还是10%的？
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8楼2013-01-10 14:37:00
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yuxiongbao

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
494750284: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-10 22:46:05
我们一般 都做时间点的
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得不到的永远在骚动
9楼2013-01-10 22:30:58
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494750284

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yuxiongbao at 2013-01-10 22:30:58
我们一般 都做时间点的

可以具体说说吗？说一下您的大概步骤。比如siRNA转染→换液（培养基浓度？）→培养（您所说的时间点？）→流式检测。多谢了，如果觉得麻烦，推荐篇文献也可以
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10楼2013-01-10 22:49:00
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