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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序出不来
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[交流] 测序出不来 已有8人参与

pcr回收的产物送到华大去测序，但是测不出来，让重新制备样品，可是再从新做还是胶回收啊？真愁人，有没有前辈指点一下，该怎么弄啊
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1楼 2013-01-08 10:54:02
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cenjing1

铜虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 小小技术官 at 2013-01-09 13:12:14
胶回收最后一步是不是用水溶的呢？我之前送的测序质粒是用TE溶的，浓度都到800ng/ul了，照样测序失败。

感觉华大测序很让人心烦的，快递2天，测序两天，测不出来再来一遍，反反复复无穷尽。。。

为什么质粒要胶回收呢，我以前一般都是直接送小摇后的菌液去华大测序，一般摇匀2ml，送去1.5ml就行，他们家测的一直都不错，克隆测序的结果也还行。难道现在质量又下降了？
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7楼2013-01-09 22:23:19
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platanus

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
华大测不出来的原因是什么呢？你回收完之后是否检测过回收的样品呢？最好确定回收到的样品没有问题再送样测序。
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2楼2013-01-08 11:25:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
测不出来的原因可能的浓度问提或者是纯度问题。首先，你可以把回收的片段再跑一下胶看看，是否回收到了一定浓度的产物。此外，PCR产物有可能是多个分子量近似的片段，因为产物不单一，有时候测序会读不出来的。你可以试试克隆到载体里挑单克隆再送测序。
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3楼2013-01-08 13:19:46
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还有你用的引物是自己合成的还是通用引物，引物的特异性也要考虑，有时候正向引物测序不成功，但是反向引物却能够成功测序。祝好运！
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4楼2013-01-08 13:25:00
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