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芥末猫

银虫 (小有名气)

[交流] 测序出不来 已有8人参与

pcr回收的产物送到华大去测序,但是测不出来,让重新制备样品,可是再从新做还是胶回收啊?真愁人,有没有前辈指点一下,该怎么弄啊
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platanus

木虫 (著名写手)


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华大测不出来的原因是什么呢?你回收完之后是否检测过回收的样品呢?最好确定回收到的样品没有问题再送样测序。
2楼2013-01-08 11:25:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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测不出来的原因可能的浓度问提或者是纯度问题。首先,你可以把回收的片段再跑一下胶看看,是否回收到了一定浓度的产物。此外,PCR产物有可能是多个分子量近似的片段,因为产物不单一,有时候测序会读不出来的。你可以试试克隆到载体里挑单克隆再送测序。
3楼2013-01-08 13:19:46
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
还有你用的引物是自己合成的还是通用引物,引物的特异性也要考虑,有时候正向引物测序不成功,但是反向引物却能够成功测序。祝好运!
4楼2013-01-08 13:25:00
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小小技术官

木虫 (正式写手)


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胶回收最后一步是不是用水溶的呢?我之前送的测序质粒是用TE溶的,浓度都到800ng/ul了,照样测序失败。

感觉华大测序很让人心烦的,快递2天,测序两天,测不出来再来一遍,反反复复无穷尽。。。
生活是一面镜子,要笑着面对!
5楼2013-01-09 13:12:14
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Renavatio

木虫 (小有名气)


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5楼: Originally posted by 小小技术官 at 2013-01-09 13:12:14
胶回收最后一步是不是用水溶的呢?我之前送的测序质粒是用TE溶的,浓度都到800ng/ul了,照样测序失败。

感觉华大测序很让人心烦的,快递2天,测序两天,测不出来再来一遍,反反复复无穷尽。。。

测序要求使用水溶解吧...
Undefined!
6楼2013-01-09 15:52:17
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cenjing1

铜虫 (初入文坛)


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5楼: Originally posted by 小小技术官 at 2013-01-09 13:12:14
胶回收最后一步是不是用水溶的呢?我之前送的测序质粒是用TE溶的,浓度都到800ng/ul了,照样测序失败。

感觉华大测序很让人心烦的,快递2天,测序两天,测不出来再来一遍,反反复复无穷尽。。。

为什么质粒要胶回收呢,我以前一般都是直接送小摇后的菌液去华大测序,一般摇匀2ml,送去1.5ml就行,他们家测的一直都不错,克隆测序的结果也还行。难道现在质量又下降了?
7楼2013-01-09 22:23:19
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hubohuna

新虫 (初入文坛)


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浓度不够或者纯度不够吧,建议先ta克隆。
8楼2013-01-09 22:28:18
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小小技术官

木虫 (正式写手)


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7楼: Originally posted by cenjing1 at 2013-01-09 22:23:19
为什么质粒要胶回收呢,我以前一般都是直接送小摇后的菌液去华大测序,一般摇匀2ml,送去1.5ml就行,他们家测的一直都不错,克隆测序的结果也还行。难道现在质量又下降了?...

关键是我送菌液,他们反馈提不出质粒。,
我克隆个序列送了4次样了,各种不尽人意!
生活是一面镜子,要笑着面对!
9楼2013-01-10 16:27:35
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cdmmore

铜虫 (小有名气)


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引用回帖:
9楼: Originally posted by 小小技术官 at 2013-01-10 16:27:35
关键是我送菌液,他们反馈提不出质粒。,
我克隆个序列送了4次样了,各种不尽人意!...

尝试到英俊测序吧,他家还可以
10楼2013-01-10 17:05:18
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