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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何扩增某一功能蛋白的未知基因
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那比较难了，没有同源的蛋白，样品又少。弱弱的问一下，干扰素大多是核酸酶，抗病毒的，对不？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2013-01-08 20:00:36
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monica_1436

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-01-08 20:00:36
那比较难了，没有同源的蛋白，样品又少。弱弱的问一下，干扰素大多是核酸酶，抗病毒的，对不？

干扰素不是核酸酶吧!我没见到有这样描述他的文献，不过他是一种细胞因子，的确有抗病毒的作用
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老旺夫了
12楼2013-01-09 09:17:24
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by monica_1436 at 2013-01-09 09:17:24
干扰素不是核酸酶吧!我没见到有这样描述他的文献，不过他是一种细胞因子，的确有抗病毒的作用...

多谢，我不懂这个。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2013-01-09 14:49:03
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

【答案】应助回帖

去NCBI搜索interferon，我就不信没有序列，比如你研究猪，得到羊的序列后在猪的基因组blast，看看有没有，有了就设计引物，只有片段的话就RACE
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坚强面对生活
14楼2013-04-15 15:19:12
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

不知道氨基酸序列，只要知道基因序列，甚至于部分基因序列就可以扩增，只要能够把该基因提取出来，接上强启动子就很容易扩增。部分基因序列提取该基因，可以用基因组文库，反向PCR就可以提出该基因全序列，然后导入质粒载体，装入（制备细菌感受态、电传导、病毒传导、显微注射）工程细胞高效表达即可。可以在构建载体时在N末端接上His6基因，然后用Ni亲和层析柱提出以富集。
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15楼2013-04-15 15:32:06
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

你总有该蛋白质的样品吧，直接对它进行氨基酸测序，然后根据序列大致确定其可能的DNA序列，再用反向PCR，RACE，DNA文库调出其全部序列。
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16楼2013-04-15 15:35:29
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

楼主说的扩增是PCR体外扩增？那更简单了，通过我上面的回答，获得基因的部分序列，就可以用RACE和反向PCR扩增了。
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17楼2013-04-15 15:59:40
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shucanwei

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 力亮 at 2013-01-07 13:33:41
你说的咋这么模糊啊？知道功能却不知道基因，咋知道的功能啊？肯定有相应已经报道的了。你还是再看看吧。
你是想搞第一个吃螃蟹的人啊？呵呵   那你还是小心点啊！

如果测序得到的序列是未知功能的，那该怎么做呢？有意义吗？
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
18楼2014-06-03 16:31:16
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shucanwei

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-01-08 08:42:07
那就测蛋白序列，可以直接拿给公司做；不用测全长，测一部分肽段就够用，另一边可以用随机引物。
...

如果测序得到的序列是未知功能的，那该怎么做呢？有意义吗？
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
19楼2014-06-03 16:31:37
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东方亦雪

铁虫 (初入文坛)
你好，我和你遇到相似的问题，有关真菌的一种蛋白，希望 楼主给出建议如何扩增某一功能蛋白的未知基因？
非常感谢！
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20楼2014-10-08 21:29:49
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