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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 农林综合 » RACE基因克隆5'总是到不了头
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alman001

铜虫 (小有名气)

[求助] RACE基因克隆5'总是到不了头

本人从甘薯中同源克隆一个基因，做5'RACE总是到不了头，每次做出的结果总是止步于特定位置的氨基酸就再也不往5'端走了，这是怎么回事呢？是不是我做的基因5'端结构比较复杂啊，怎么解决呢？做了好久了，急啊，求助大家帮我想想办法！多谢！
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有事做，无事争
1楼 2013-01-06 16:37:59
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longanzz

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

换用不同的方法试一下。我原来也是一个基因很难做出，后来使用不同的方法做出来了。再就是翻转后的产物最后直接做RACE，不要放的太久了。祝顺利!
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8楼2013-03-23 07:05:31
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titus0805

铁虫 (小有名气)
多长的基因啊？用哪种方法？
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2楼2013-01-07 18:07:10
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alman001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by titus0805 at 2013-01-07 18:07:10
多长的基因啊？用哪种方法？

约2KB，用的takara 5' RACE的盒子，请问您有什么好办法吗？？谢谢啊！
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有事做，无事争
4楼2013-01-08 21:24:15
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

takara的5'race做出来应该就倒头了。你是怎么确认没有到头的呢？没有起始密码子？
不能完全按同源物种里面序列的长短判断，只要有完整读框，符合kozak规则就行了
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5楼2013-01-11 22:19:57
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