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alman001

铜虫 (小有名气)

[求助] RACE基因克隆5'总是到不了头

本人从甘薯中同源克隆一个基因,做5'RACE总是到不了头,每次做出的结果总是止步于特定位置的氨基酸就再也不往5'端走了,这是怎么回事呢?是不是我做的基因5'端结构比较复杂啊,怎么解决呢?做了好久了,急啊,求助大家帮我想想办法!多谢!
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有事做,无事争
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titus0805

铁虫 (小有名气)

多长的基因啊?用哪种方法?
2楼2013-01-07 18:07:10
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mjn404

新虫 (初入文坛)

我也是啊!
3楼2013-01-07 19:57:18
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alman001

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by titus0805 at 2013-01-07 18:07:10
多长的基因啊?用哪种方法?

约2KB,用的takara 5' RACE的盒子,请问您有什么好办法吗??谢谢啊!
有事做,无事争
4楼2013-01-08 21:24:15
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

takara的5'race做出来应该就倒头了。你是怎么确认没有到头的呢?没有起始密码子?
不能完全按同源物种里面序列的长短判断,只要有完整读框,符合kozak规则就行了
5楼2013-01-11 22:19:57
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匿名

用户注销 (职业作家)

Matlab专家

本帖仅楼主可见
6楼2013-01-12 00:00:09
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wangbuliuxin

新虫 (初入文坛)

请教楼主,是如何根据同源基因克隆序列设计引物的
7楼2013-03-22 19:48:31
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longanzz

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

换用不同的方法试一下。我原来也是一个基因很难做出,后来使用不同的方法做出来了。再就是翻转后的产物最后直接做RACE,不要放的太久了。祝顺利!
8楼2013-03-23 07:05:31
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