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根茎类中药DNA提取
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各位大神，对于根茎类中药材DNA提取可有好的建议！！求助啊^……小弟现在金币不多！ |
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2楼2013-01-06 09:43:59
tigertang
木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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1.根茎中估计多糖含量比较多，建议用CTAB法； 2.尽量增加除糖步骤 以下出自：http://www.genesail.com/newDetail.aspx?id=81&typeid=31 如何消除多糖的影响？ A3：一般来说，SDS法提取的DNA会还有较多的多糖，使DNA成胶冻状。而CTAB DNA提取纯化法可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比较高，可尝试以下方法： 1、在DNA未溶出之前，先用一些缓冲液洗去多糖。可用缓冲液如：100 mmol/L Tris –HCl (pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol。 2、使DNA提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入0.35倍体积的无水乙醇，迅速混匀，多糖会先沉淀。 3、沉淀DNA时，使多糖保留在溶液中。如用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积的5 mol/L NaCl，或加NH4Ac使终浓度为 10 mmol/L；或0.5 ml DNA液中加5 ml 4 mol/L NaCl 和 0.625 mL 13% PEG 8000（冰浴 1 h）。 4、多糖和DNA的共沉淀物进行再分离。如用TE缓冲液反复清洗共沉淀物，将清洗液合并再用醇沉淀DNA，或将沉淀物溶解后，经琼脂糖电泳，切下DNA部 分再将胶回收，或者用多糖水解酶将多糖降解。 |
3楼2013-01-06 11:21:32