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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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细细的风

新虫 (初入文坛)

[求助] 根茎类中药DNA提取

各位大神,对于根茎类中药材DNA提取可有好的建议!!求助啊^……小弟现在金币不多!
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细细的风

新虫 (初入文坛)

2楼2013-01-06 09:43:59
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tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.根茎中估计多糖含量比较多,建议用CTAB法;

2.尽量增加除糖步骤

以下出自:http://www.genesail.com/newDetail.aspx?id=81&typeid=31
如何消除多糖的影响?
A3:一般来说,SDS法提取的DNA会还有较多的多糖,使DNA成胶冻状。而CTAB DNA提取纯化法可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比较高,可尝试以下方法:
1、在DNA未溶出之前,先用一些缓冲液洗去多糖。可用缓冲液如:100 mmol/L Tris –HCl (pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol。
2、使DNA提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入0.35倍体积的无水乙醇,迅速混匀,多糖会先沉淀。
3、沉淀DNA时,使多糖保留在溶液中。如用乙醇沉淀时,在待沉淀溶液中加入1/2体积的5 mol/L NaCl,或加NH4Ac使终浓度为 10 mmol/L;或0.5 ml DNA液中加5 ml 4 mol/L NaCl 和 0.625 mL 13% PEG 8000(冰浴 1 h)。 4、多糖和DNA的共沉淀物进行再分离。如用TE缓冲液反复清洗共沉淀物,将清洗液合并再用醇沉淀DNA,或将沉淀物溶解后,经琼脂糖电泳,切下DNA部 分再将胶回收,或者用多糖水解酶将多糖降解。
3楼2013-01-06 11:21:32
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