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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 还是酶切
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zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)

[交流] 还是酶切 已有3人参与

只有两个酶切位点的质粒单酶切，预期有两个目的条带（质粒，目的片段），现在出来4个条带，可能的原因是什么，请高手分析！
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1楼 2013-01-05 10:39:38
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目的片段确定没有多余的酶切位点麽，还有质粒上有没有你的酶切位点，另外酶切时间多久，这些都可能造成得不到预期的实验结果
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2013-01-05 10:56:14
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zhang881007

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
检查你自己的酶用量，是否完全水解质粒。 是否有可能是，环状质粒，单酶切质粒？
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shine
3楼2013-01-05 11:01:48
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zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2013-01-05 10:56:14
目的片段确定没有多余的酶切位点麽，还有质粒上有没有你的酶切位点，另外酶切时间多久，这些都可能造成得不到预期的实验结果

确定没有多余的酶切位点；酶切37度时间7分，说明书建议5分，难道是时间太长了？
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4楼2013-01-05 13:47:05
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zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-05 11:01:48
检查你自己的酶用量，是否完全水解质粒。 是否有可能是，环状质粒，单酶切质粒？

20微体系，1微的酶，完全按protocol添加，是的单酶切质粒
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5楼2013-01-05 13:48:56
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zzhhaaoouu at 2013-01-05 13:47:05
确定没有多余的酶切位点；酶切37度时间7分，说明书建议5分，难道是时间太长了？...

可能是不完全酶切，四条序列中有完全酶切的线性空质粒和片段，另外两个单酶切的质粒和超螺旋的质粒。你拿没酶切的质粒做对照跑电泳看看。
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6楼2013-01-05 14:01:53
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