24小时热门版块排行榜    

查看: 530  |  回复: 5

zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)

[交流] 还是酶切 已有3人参与

只有两个酶切位点的质粒单酶切,预期有两个目的条带(质粒,目的片段),现在出来4个条带,可能的原因是什么,请高手分析!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
目的片段确定没有多余的酶切位点麽,还有质粒上有没有你的酶切位点,另外酶切时间多久,这些都可能造成得不到预期的实验结果
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2013-01-05 10:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
检查你自己的酶用量,是否完全水解质粒。 是否有可能是,环状质粒,单酶切质粒?
shine
3楼2013-01-05 11:01:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2013-01-05 10:56:14
目的片段确定没有多余的酶切位点麽,还有质粒上有没有你的酶切位点,另外酶切时间多久,这些都可能造成得不到预期的实验结果

确定没有多余的酶切位点;酶切37度时间7分,说明书建议5分,难道是时间太长了?
4楼2013-01-05 13:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-05 11:01:48
检查你自己的酶用量,是否完全水解质粒。 是否有可能是,环状质粒,单酶切质粒?

20微体系,1微的酶,完全按protocol添加,是的单酶切质粒
5楼2013-01-05 13:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zzhhaaoouu at 2013-01-05 13:47:05
确定没有多余的酶切位点;酶切37度时间7分,说明书建议5分,难道是时间太长了?...

可能是不完全酶切,四条序列中有完全酶切的线性空质粒和片段,另外两个单酶切的质粒和超螺旋的质粒。你拿没酶切的质粒做对照跑电泳看看。
6楼2013-01-05 14:01:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zzhhaaoouu 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +17 Lanmanbaby 2026-08-09 29/1450 2026-08-12 00:24 by zhanghaozhu
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +3 工厂打螺丝 2026-08-08 3/150 2026-08-11 13:42 by 会议编辑
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
信息提示
请填处理意见