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zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)

[交流] 还是酶切 已有3人参与

只有两个酶切位点的质粒单酶切,预期有两个目的条带(质粒,目的片段),现在出来4个条带,可能的原因是什么,请高手分析!
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer


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目的片段确定没有多余的酶切位点麽,还有质粒上有没有你的酶切位点,另外酶切时间多久,这些都可能造成得不到预期的实验结果
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2013-01-05 10:56:14
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zhang881007

金虫 (小有名气)


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检查你自己的酶用量,是否完全水解质粒。 是否有可能是,环状质粒,单酶切质粒?
shine
3楼2013-01-05 11:01:48
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zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2013-01-05 10:56:14
目的片段确定没有多余的酶切位点麽,还有质粒上有没有你的酶切位点,另外酶切时间多久,这些都可能造成得不到预期的实验结果

确定没有多余的酶切位点;酶切37度时间7分,说明书建议5分,难道是时间太长了?
4楼2013-01-05 13:47:05
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zzhhaaoouu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-05 11:01:48
检查你自己的酶用量,是否完全水解质粒。 是否有可能是,环状质粒,单酶切质粒?

20微体系,1微的酶,完全按protocol添加,是的单酶切质粒
5楼2013-01-05 13:48:56
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zhaodahe

木虫 (正式写手)


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4楼: Originally posted by zzhhaaoouu at 2013-01-05 13:47:05
确定没有多余的酶切位点;酶切37度时间7分,说明书建议5分,难道是时间太长了?...

可能是不完全酶切,四条序列中有完全酶切的线性空质粒和片段,另外两个单酶切的质粒和超螺旋的质粒。你拿没酶切的质粒做对照跑电泳看看。
6楼2013-01-05 14:01:53
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