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weide12

银虫 (小有名气)

[交流] HMR问题 已有4人参与

Tm取决于GC含量：G:C〉A:T〉G:G〉G:T.........
这是考虑一条双链DNA，那么要考虑到人为二倍体时，怎么区分一条DNA正常，一条DNA含碱基突变呢。
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dongrh1981

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1楼 2013-01-03 17:04:40
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dongrh1981

金虫 (正式写手)
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引用回帖:
6楼: Originally posted by weide12 at 2013-01-07 14:24:40
看到一个公司的说明上，他认为SNP是一条DNA上的碱基错配，而我认为是一个碱基发生突变，与其配对的碱基也发生改变。正常基因中存不存在错配碱基...

正常基因中不存在错配碱基，就算存在机体DNA的自我修复功能也会将其纠正。但是在HRM过程中，但二倍体样本为杂合子时，解链后再退火时就会存在二倍体突变DNA双链中的一条与野生DNA双链中的一条非特异退火，导致出现一个碱基错配的异源双链，这时就会出现LZ所说的情况了。
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呼吸的痛
7楼2013-01-07 14:47:12
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drxiao2005

金虫 (小有名气)
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最后做熔解曲线时，会先把扩增产物变性再退火。这一过程会形成一些杂合双链，一般退火温度较低。
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2楼2013-01-04 07:58:27
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dongrh1981

金虫 (正式写手)
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-05 17:36:11
HRM的特点就是分辨率很高，可以成功的分辨一个碱基差异的双链DNA.
当楼主所说的二倍体出现时，熔解曲线会是野生型和突变型曲线的融合，处于两条溶解曲线中间，可以通过加野生和突变参照进行判断，也可结合以前的实验结果或经验来判断。
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呼吸的痛
3楼2013-01-05 11:04:38
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adams51

金虫 (小有名气)
★
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是HRM吧，楼上说的就是答案！
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4楼2013-01-05 11:35:18
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