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weide12

银虫 (小有名气)

[交流] HMR问题 已有4人参与

Tm取决于GC含量:G:C〉A:T〉G:G〉G:T.........
这是考虑一条双链DNA,那么要考虑到人为二倍体时,怎么区分一条DNA正常,一条DNA含碱基突变呢。
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drxiao2005

金虫 (小有名气)


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最后做熔解曲线时,会先把扩增产物变性再退火。这一过程会形成一些杂合双链,一般退火温度较低。
2楼2013-01-04 07:58:27
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dongrh1981

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
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送鲜花一朵
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-05 17:36:11
HRM的特点就是分辨率很高,可以成功的分辨一个碱基差异的双链DNA.
当楼主所说的二倍体出现时,熔解曲线会是野生型和突变型曲线的融合,处于两条溶解曲线中间,可以通过加野生和突变参照进行判断,也可结合以前的实验结果或经验来判断。
呼吸的痛
3楼2013-01-05 11:04:38
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adams51

金虫 (小有名气)


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是HRM吧,楼上说的就是答案!
4楼2013-01-05 11:35:18
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美可爱的土豆

新虫 (初入文坛)


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HRM,高分辨率熔解曲线,学习一下。
5楼2013-01-05 14:50:28
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weide12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dongrh1981 at 2013-01-05 11:04:38
HRM的特点就是分辨率很高,可以成功的分辨一个碱基差异的双链DNA.
当楼主所说的二倍体出现时,熔解曲线会是野生型和突变型曲线的融合,处于两条溶解曲线中间,可以通过加野生和突变参照进行判断,也可结合以前的实 ...

看到一个公司的说明上,他认为SNP是一条DNA上的碱基错配,而我认为是一个碱基发生突变,与其配对的碱基也发生改变。正常基因中存不存在错配碱基
6楼2013-01-07 14:24:40
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dongrh1981

金虫 (正式写手)


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引用回帖:
6楼: Originally posted by weide12 at 2013-01-07 14:24:40
看到一个公司的说明上,他认为SNP是一条DNA上的碱基错配,而我认为是一个碱基发生突变,与其配对的碱基也发生改变。正常基因中存不存在错配碱基...

正常基因中不存在错配碱基,就算存在机体DNA的自我修复功能也会将其纠正。但是在HRM过程中,但二倍体样本为杂合子时,解链后再退火时就会存在二倍体突变DNA双链中的一条与野生DNA双链中的一条非特异退火,导致出现一个碱基错配的异源双链,这时就会出现LZ所说的情况了。
呼吸的痛
7楼2013-01-07 14:47:12
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