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崔永霞铁虫 (小有名气)
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[求助]
RACE技术都需要对总RNA进行脱磷酸和脱帽处理吗
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| 各位前辈，想请教一下，RACE技术都需要进行脱磷酸和脱帽处理吗？我看一些文献上写的是5'RACE做脱磷酸和脱帽处理，3'没做这个处理，这到底是怎么回事啊？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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崔永霞
铁虫 (小有名气)
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3楼2013-01-04 10:08:04
【答案】应助回帖
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崔永霞: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-04 10:05:29
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崔永霞: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-04 10:05:29
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你因该是没搞清楚mRNA结构和RACE 原理： mRNA: 5‘ A B 3’（编辑不出线条，你就凑活着看吧。） 1.mRNA合成后会在5‘加帽,磷酸化 3’加ploA 2.图中AB两点为mRNA断裂产生的（你得想明白这点，就都明白了。） 3. 3'是利用mRNA3’端的ploA和A点（图中标注）为引物结合为点扩出两点间的片段;A为用已知序。 4.利用3‘测序结果设计B点引物。 5. 5‘RACE是先在5’端加一个接头然后利用接头和B点为引物结合位点扩两点间片段。因为5‘加了帽和磷酸化 所以在加接头之前需要去帽和磷酸化。而做3’是不关乎帽和磷酸化，就不用去了！！！ |
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2楼2013-01-02 12:12:03
4楼2013-01-05 09:07:39
5楼2013-01-05 09:17:43