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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] RACE技术都需要对总RNA进行脱磷酸和脱帽处理吗

各位前辈，想请教一下，RACE技术都需要进行脱磷酸和脱帽处理吗？我看一些文献上写的是5'RACE做脱磷酸和脱帽处理，3'没做这个处理，这到底是怎么回事啊？
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【分子生物】EPI帖

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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2013-01-02 11:19:58
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励热心积极应助 2013-01-02 13:35:09
崔永霞: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-04 10:05:29
你因该是没搞清楚mRNA结构和RACE 原理：
mRNA:     5‘                     A  B                             3’（编辑不出线条，你就凑活着看吧。）
1.mRNA合成后会在5‘加帽,磷酸化      3’加ploA
2.图中AB两点为mRNA断裂产生的（你得想明白这点，就都明白了。）
3. 3'是利用mRNA3’端的ploA和A点（图中标注）为引物结合为点扩出两点间的片段;A为用已知序。
4.利用3‘测序结果设计B点引物。
5. 5‘RACE是先在5’端加一个接头然后利用接头和B点为引物结合位点扩两点间片段。因为5‘加了帽和磷酸化
所以在加接头之前需要去帽和磷酸化。而做3’是不关乎帽和磷酸化，就不用去了！！！
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崔永霞
脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
2楼2013-01-02 12:12:03
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by hch123 at 2013-01-02 12:12:03
你因该是没搞清楚mRNA结构和RACE 原理：
mRNA:     5‘                     A  B                             3’（编辑不出线条，你就凑活着看吧。）
1.mRNA合成后会在5‘加帽,磷酸化      3’加ploA
2.图中 ...

2.图中AB两点为mRNA断裂产生的。这句话是啥意思？看不明白啊？
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
3楼2013-01-04 10:08:04
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hch123

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-01-04 10:08:04
2.图中AB两点为mRNA断裂产生的。这句话是啥意思？看不明白啊？...

很抱歉没能及时给你回帖！
就AB两点  后来我想了一下断不断裂他都在的，就是RNA上的两个点，只是那样想好理解RACE，也并不用在意。对由此给你带来的困扰我很抱歉！我会再发一帖阐述我的理解方式。
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
4楼2013-01-05 09:07:39
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hch123

金虫 (正式写手)
我对于RACE的理解方式，仅供参考！
首先做3'RACE时设计引物的模板序列式包括A点的，所以设计出A点引物。此时可以理解为在提取时RNA发生断裂产生了由A到ploA的一段。最后通过A点和ploA为结合位点扩出3‘端。  5‘也可以这么理解。  现在想来，完全没有必要这么想，断不断他都在那里，不来不去……
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崔永霞
脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
5楼2013-01-05 09:17:43
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崔永霞

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hch123 at 2013-01-05 09:17:43
我对于RACE的理解方式，仅供参考！
首先做3'RACE时设计引物的模板序列式包括A点的，所以设计出A点引物。此时可以理解为在提取时RNA发生断裂产生了由A到ploA的一段。最后通过A点和ploA为结合位点扩出3‘端。  5‘也 ...

非常感谢。
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
6楼2013-01-05 12:29:48
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