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pliu6682

木虫 (正式写手)

[求助] pcr 引物二聚体出现是不是在酶的作用下产生的

各位大侠,我想验证自己pcr酶的活性,但只出现了引物二聚体,做的对照是有目的条带p出来。我想问,引物二聚体是在Taq酶的作用下形成的,还是自身在温度变化时聚合形成的啊?出了引物二聚体是不是说明我的酶是没问题的哪?
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txw87

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
pliu6682: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-10 11:15:57
这个我与楼上有不同意见,引物自身的量是很大的
PCR产物都能看见,而引物的量是远大于PCR产物的量的(我们都知道引物是要过量的)
检测的灵敏度应该看物质的量(mol)而不应该看质量(g)
所以,你能看到不代表酶就一定有活性,你可以传图上来看看,大家分析分析
11楼2013-01-04 18:27:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
pliu6682: 金币+1, 有帮助, 请问有没有理论依据,谢谢 2012-12-31 10:31:08
pliu6682: 金币+4, ★★★很有帮助, 还是谢谢了 2013-01-10 11:15:34
引物二聚体自身是可以聚合,在酶的作用下,可以用dNTP为底物扩增。如果没有聚合酶,通常PCR反应中加入的引物量应该很难跑胶检测出来的。如果看到明显的引物二聚体,DNA聚合酶应该是起作用的。
2楼2012-12-31 09:30:49
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pliu6682

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-31 09:30:49
引物二聚体自身是可以聚合,在酶的作用下,可以用dNTP为底物扩增。如果没有聚合酶,通常PCR反应中加入的引物量应该很难跑胶检测出来的。如果看到明显的引物二聚体,DNA聚合酶应该是起作用的。

如果没有酶的话,引物二聚体是不会出现的,是吗?
3楼2012-12-31 10:29:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by pliu6682 at 2012-12-31 10:29:17
如果没有酶的话,引物二聚体是不会出现的,是吗?...

不是不会出现,是会形成,但量不足以观察到。
4楼2012-12-31 13:12:01
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