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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

[求助] 挥大泪求助啊,细胞状态越来越差还变少,什么原因啊(觉得不太像污染)

同一天复苏的U937细胞,状态更差的都长好并冻存上了,状态稍差一点点的两瓶在即将冻存和传代的时候,换了新一瓶血清后,细胞就开始增值的慢并且减少,加大FBS至20%培养,三天培养液也没怎么变黄(以前都是变黄了表示细胞长得快该换液了),且晃动时肉眼看不到细胞了(之前可以看到),培养液澄清,未有菌丝、串珠、杆状或蠕动小黑点。再次换以20%FBS的1640,四天了!!!四天了!!!培养液还是换时候的颜色,澄清,无菌丝、串珠、杆状或蠕动小黑点,且镜下细胞大幅减少。我都要崩溃了,本来都要准备加药了,现在这个样,我不知道是哪种污染?还是新血清不好?1640是从复苏开始一直在用的同一瓶,血清是同一家代理公司买的hyclone南美胎牛血清。我觉得基本可以排除细菌真菌污染, 但不知支原体污染是几天可以看出症状?这已经7天了。到底是啥原因跪求各位高手指点!!!感激不尽,多少金币也奉上!!谢谢啊
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Lynn和Mia: 金币+6, 有帮助, 感谢积极回帖,但是再看看我图片试试 2012-12-28 17:10:20
我觉得比较像支原体污染的,要不你加点拜有利试试,看看能不能抑制支原体生长,再或者买个专测支原体的试剂盒,做做pcr来确定一下
万物皆有毒,只要剂量足
2楼2012-12-28 16:40:42
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美丽传说

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-12-28 17:02:18
Lynn和Mia: 金币+6, 有帮助, 谢谢回帖~~~ 2012-12-28 17:20:00
你描述的像是黑胶虫,建议你换血清
3楼2012-12-28 16:49:21
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 448935271 at 2012-12-28 16:40:42
我觉得比较像支原体污染的,要不你加点拜有利试试,看看能不能抑制支原体生长,再或者买个专测支原体的试剂盒,做做pcr来确定一下

我查了一下午的细胞污染和图片,但是我这个前前后后已经7天了,支原体污染是不是该有啥症状出来了啊?可我还是澄清不变色,小黑点也很少,正常黑点数啊那种,也不是小黑点,有点还比较大,不是沙子样,就像一直养的时候那种蛋白质沉淀的东西。而且,很重要的一点是,四天前我换的液,四天后培养液颜色没有变,然后我今天中午十二点还是换了液,用了自己的血清和别人的血清作对比,四个小时后,我去看细胞,发现变化很大,如图,最上面小瓶是别人血清,中间第一个大瓶是我的血清,最底下大瓶是别人血清,我先换的大瓶的液,再换的小瓶的液,四个小时后,小瓶明显变黄,大瓶基本还没变
4楼2012-12-28 17:16:31
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 美丽传说 at 2012-12-28 16:49:21
你描述的像是黑胶虫,建议你换血清

我刚刚仔细去看了细胞,没有沙子一样多的小黑点,只有正常以前也有的那种血清变形蛋白那种黑东西,也不多,而且并不蠕动,谢谢回帖
5楼2012-12-28 17:19:31
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 448935271 at 2012-12-28 16:40:42
我觉得比较像支原体污染的,要不你加点拜有利试试,看看能不能抑制支原体生长,再或者买个专测支原体的试剂盒,做做pcr来确定一下

那啥,怎么传不上图片。。。不过就是说换了别的血清,培养液迅速变黄了,而且细胞长大了,数量增加不止四倍,在4小时内
6楼2012-12-28 17:21:15
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 448935271 at 2012-12-28 16:40:42
我觉得比较像支原体污染的,要不你加点拜有利试试,看看能不能抑制支原体生长,再或者买个专测支原体的试剂盒,做做pcr来确定一下

http://www.baidupcs.com/file/871 ... 4%3D&expires=1h
7楼2012-12-28 17:28:20
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美丽传说

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
Lynn和Mia: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢回帖呀 2013-01-06 14:31:36
细胞增殖一般就没什么问题了,至于具体什么问题我没有办法确定。如果细胞后期还是不行的话,你可以用吞噬细胞养一下,我用过这种方法,效果很好
8楼2012-12-31 11:38:10
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448935271

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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Lynn和Mia: 金币+16, ★★★很有帮助, 非常感谢回帖,我也怀疑血清 2013-01-06 14:32:05
支原体感染基本上培养也不会有什么明显的改变,但是细胞往往涨涨停停,而且生长的速度非常的慢,但是根据你后来描述的显现,倒有点像是你的血清出现了问题而不是你的细胞
万物皆有毒,只要剂量足
9楼2013-01-04 08:28:15
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 美丽传说 at 2012-12-31 11:38:10
细胞增殖一般就没什么问题了,至于具体什么问题我没有办法确定。如果细胞后期还是不行的话,你可以用吞噬细胞养一下,我用过这种方法,效果很好

谢谢回复  这细胞是不会再要了的,但是要知道原因啊,不想半个多月的功夫就没什么经验教训地白白浪费了,所以还在查原因。细胞大部分是黑黑的,但是也有正常大小且透亮的极少数,过几天再去看(期间不再换液,培养液颜色也没有变黄)黑黑的细胞变少了,估计是死完了,原本透亮的极少数细胞增殖了,长出来好几个新细胞团在一团,距离上次换培养液三天培养液里暂时还未看出啥蠕动或菌丝
10楼2013-01-06 14:30:38
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