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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA测序
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匿名

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1楼 2012-12-28 10:13:54
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友谅2010

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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wanquanyuan: 金币+1, ★有帮助 2013-01-01 14:20:39
你好，之前我也出现过如你所述的情况。送了三家测序公司测序都测不通，理由是里面有发卡结构存在。后来在减少引物添加量（引物含量过多容易形成二聚体及可能形成高级结构）及适当提高退火温度2-3度，得到pcr产物后，送到上海英浚测序后，最终测出来了。建议你也可以试试。
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理智分析，大胆实践
7楼2012-12-30 20:06:30
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普通回帖

lihongbo840427

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的PCR产物经过电泳检测和测OD没？有没有达到测序的要求。
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2楼2012-12-28 11:28:41
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
片段连载体，转化感受态，培养，挑克隆，筛菌，送阳性菌液。
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3楼2012-12-28 15:50:30
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zq347597638

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-30 22:16:35
测序前要注意PCR扩增产物可纯  亮度可够
你用的什么引物啊，难道是还有GC夹子的？
上海生工测序还不错啊，可以直接测序和克隆测序，一般都能测序出来的！
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4楼2012-12-28 17:29:50
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nangyingyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
片段连载体，转化感受态，培养，挑克隆，筛菌，送阳性菌液。
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5楼2012-12-28 17:47:17
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的已经做了单克隆测序了吧，两端还是测不通吗？还有你的目的基因是已知的还是未知的？
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生物化学与分子生物学
6楼2012-12-28 18:05:02
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匿名

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8楼2012-12-31 15:55:29
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9楼2012-12-31 15:56:36
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10楼2012-12-31 15:59:08
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