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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA测IgE滴度的问题！！求教！！
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moneywj

新虫 (初入文坛)

[求助] ELISA测IgE滴度的问题！！求教！！

我是用ELISA测定小鼠血清中IgE的滴度

包被的抗原，然后一抗就是小鼠血清，二抗是生物素标记的抗小鼠IgE，三抗是HRP-链霉亲和素，最后TMB显色。

最近总是出现吸光度和稀释度不成比例的情况，就是稀释度越大吸光度反而更高了，比如说就是1:64稀释的吸光度要小于1:512倍稀释的。

想问一下这个情况是因为什么原因出现的？师姐说我是血清没混匀，但是我这个情况出现了好几次了，是不是就是会出现这种情况？是有一个最佳稀释度吸光度最大？
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1楼 2012-12-26 19:49:59
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我曾经也是这个问题啊：稀释50 200 500 的读数是.4 .9  1.4 试剂盒建议稀释倍数是个500 因此我觉得啊 有可能是稀释倍数太低 样品IgE浓度太高，抗原抗体结合有影响吧~ 最后还是决定用500倍的稀释倍数~~
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亦余心之所善兮虽九死其犹未悔
3楼2012-12-27 19:08:21
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这两个稀释度的吸光度是多大啊，TMB的最大吸光度在2以内，若果超了这个范围，有可能出现你说的那种现象，如果是这种问题，你可以考虑再把稀释倍数增加试试呢
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2楼2012-12-27 08:48:35
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