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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PAGE胶问题
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guxinhan123

银虫 (正式写手)

[求助] PAGE胶问题

最近配胶老是出现这种问题，请大家帮忙分析下，试剂没问题，用hofer的mini VE系统配胶，玻璃板不是原装的，分离胶配好后感觉像聚合不好的样子，有的地方厚有的薄。顺便请大家推荐下国产的比较好用的不漏胶的垂直电泳槽，谢谢了

Image9.JPG
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1楼 2012-12-25 22:11:42
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mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
左边漏液，marker偏转，可能是天冷，你的胶聚集时间偏长引起部分泄露。1。多加点TEMED，是胶能在10内凝聚。2。提高房间温度，或用红外灯加热试试。 3。底端或侧面用含0。9%Nacl 的琼脂封一下试试。
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2楼2012-12-25 22:59:03
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是不是发现 那些胶 会凝结成一道一道的？

就是中间会出现一些波纹 然后 整个胶是 厚度不太均匀的 而  那些波纹的地方正好是 厚薄交界的 “褶皱”？

或者是 左右两边 都先凝了 但是中间还没凝好？ 就像一个“沟”的形状？


这都是因为 天气冷  其实你会发现你的胶 凝固时间会延长  可能半个小时都凝不了的

我之前也一直遇到这种问题

解决的方法就是多加点 TEMED 它就会均匀了

如果是漏胶 最好的方法就是 琼脂糖封底


不建议用加热或者灯照的方法  有时候你电吹风吹得不均匀 也会凝得不好
温度尽可能不要 提高
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3楼2012-12-25 23:39:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
凝胶速度慢可能是温度的问题，也可能是用的过硫酸铵部分失效。你的APS是现配的还是以前配的STOCK？如果过硫酸铵固体感觉有些潮的话可能是药品的问题。尽管做PAGE都有配方，由于药品和做胶条件不同，自己还是要稍微调整一下APS和TEMED的用量。如果不是特殊需要，分离胶的凝的时间大约在40分钟至1小时左右。
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4楼2012-12-26 01:13:07
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guxinhan123

银虫 (正式写手)
谢谢大家，我是放在26℃的培养箱里凝胶的，确实凝的很慢，要一两个小时，AP新配效果是一样的，现象和2楼说的很相似
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5楼2012-12-26 09:55:37
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