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guxinhan123

银虫 (正式写手)

[求助] PAGE胶问题

最近配胶老是出现这种问题,请大家帮忙分析下,试剂没问题,用hofer的mini VE系统配胶,玻璃板不是原装的,分离胶配好后感觉像聚合不好的样子,有的地方厚有的薄。顺便请大家推荐下国产的比较好用的不漏胶的垂直电泳槽,谢谢了

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mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
左边漏液,marker偏转,可能是天冷,你的胶聚集时间偏长引起部分泄露。1。多加点TEMED,是胶能在10内凝聚。2。提高房间温度,或用红外灯加热试试。 3。底端或侧面用含0。9%Nacl 的琼脂封一下试试。
2楼2012-12-25 22:59:03
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是不是发现 那些胶 会凝结成一道一道的?

就是中间会出现一些波纹 然后 整个胶是 厚度不太均匀的 而  那些波纹的地方正好是 厚薄交界的 “褶皱”?

或者是 左右两边 都先凝了 但是中间还没凝好? 就像一个“沟”的形状?


这都是因为 天气冷  其实你会发现你的胶 凝固时间会延长  可能半个小时都凝不了的

我之前也一直遇到这种问题

解决的方法就是多加点 TEMED 它就会均匀了

如果是漏胶 最好的方法就是 琼脂糖封底


不建议用加热或者灯照的方法  有时候你电吹风吹得不均匀 也会凝得不好
温度尽可能不要 提高
3楼2012-12-25 23:39:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶速度慢可能是温度的问题,也可能是用的过硫酸铵部分失效。你的APS是现配的还是以前配的STOCK?如果过硫酸铵固体感觉有些潮的话可能是药品的问题。尽管做PAGE都有配方,由于药品和做胶条件不同,自己还是要稍微调整一下APS和TEMED的用量。如果不是特殊需要,分离胶的凝的时间大约在40分钟至1小时左右。
4楼2012-12-26 01:13:07
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guxinhan123

银虫 (正式写手)

谢谢大家,我是放在26℃的培养箱里凝胶的,确实凝的很慢,要一两个小时,AP新配效果是一样的,现象和2楼说的很相似
5楼2012-12-26 09:55:37
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