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jialy2011

金虫 (著名写手)

[求助] 蛋白怎么溶解在有机溶剂中呢~

跪求~各位大神~有没有什么办法能让蛋白溶解在有机溶剂中呢~
需要加入些什么东西呢~
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jialy
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jialy2011: 金币+5 2012-12-24 23:01:57
要做RP-HPLC还是用反相填料纯化蛋白?
很多蛋白可以溶解在低浓度有机试剂中的。高浓度会导致沉淀吧。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
2楼2012-12-22 23:43:19
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-24 18:57:27
jialy2011: 金币+20 2012-12-24 23:02:17
jialy2011: 金币+20, 有帮助 2013-03-28 15:09:10
对于一些小肽来说,可以认为是没有活性的,所以一般常见的乙腈就可以溶解。
但是对一些大分子的蛋白,三级结构比较复杂的话,用有机相去溶解的话可能会失活,因为你之前是在水相里的,蛋白表面是亲水基团,一旦进入有机相可能会导致亲水基团的内置。
所以,你要先考虑你溶解之后的活性问题,再考虑要不要溶解。
至于溶解,如果只是单纯的溶解,试试乙醇,还有乙腈或者DMSO,加0.1%的甲酸或TFA。

3楼2012-12-24 09:46:49
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jialy2011

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-12-24 09:46:49
对于一些小肽来说,可以认为是没有活性的,所以一般常见的乙腈就可以溶解。
但是对一些大分子的蛋白,三级结构比较复杂的话,用有机相去溶解的话可能会失活,因为你之前是在水相里的,蛋白表面是亲水基团,一旦进入 ...

谢谢的呢~我想用的是溶菌酶~写的是它比较耐有机溶剂的~想把它溶解在乙腈里~可是不理想的~所以就想能不能加一些类似于非离子表面活性剂之类的~把它溶解了~可是不太好呀~
jialy
4楼2012-12-24 23:00:41
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jialy2011

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopyzxx at 2012-12-22 23:43:19
要做RP-HPLC还是用反相填料纯化蛋白?
很多蛋白可以溶解在低浓度有机试剂中的。高浓度会导致沉淀吧。

就是想让溶菌酶溶解在乙腈里~貌似不能溶呀~
jialy
5楼2012-12-24 23:01:31
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maychao123

银虫 (小有名气)

为什么要溶解在乙腈里呢?有啥好处?
Don‘tforget3Oct
6楼2012-12-25 08:42:20
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
jialy2011: 金币+5, 有帮助 2013-03-28 15:08:51
引用回帖:
4楼: Originally posted by jialy2011 at 2012-12-24 23:00:41
谢谢的呢~我想用的是溶菌酶~写的是它比较耐有机溶剂的~想把它溶解在乙腈里~可是不理想的~所以就想能不能加一些类似于非离子表面活性剂之类的~把它溶解了~可是不太好呀~...

我一般做蛋白的质谱时候都是在流动相中加乙腈和0.1%甲酸,蛋白还不怎么粘柱子,所以我觉得,乙腈加0.5%甲酸或者TFA就已经能溶解大部分的蛋白了。
当然可能有特例啊。一切还得你试试才知道。
7楼2012-12-25 13:20:11
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mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jialy2011: 金币+25, ★★★很有帮助 2013-03-28 15:07:40
浙大的张龙翔吧,他用有机相做糖基转移酶的糖合成,我记得他最早是用正丁醇的。乙腈太厉害了,换其他的有机试剂吧。如果你选用膜蛋白的话,你可以用去垢剂都没问题。
8楼2012-12-25 15:01:59
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jialy2011: 金币+15, 有帮助 2013-03-28 15:07:49
估计你是用来做分析的,那么不一定要溶菌酶在纯的乙腈里溶解,只要蛋白能在50%或者70%左右的乙腈中溶解,就可以用来分析了。
常用的流动相就是乙腈+0.1%的TFA或者甲醇+0.1%TFA。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
9楼2012-12-25 20:49:26
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